刘尧 张建军 李振皓 朱映黎 乐娜 张睿 南海鹏 王祥山 陈秀红 王淳 李明焱 王林元

    人口老龄化问题日益严重,衰老所引起的各种退行性疾病严重制约着老年健康及生活。 自由基学说被认为是衰老发生的机制之一,大量自由基的产生会攻击细胞内物质引起氧化应激[1]。 近年来“血瘀致衰”理论受到重视[2],中医认为老年多气虚,由此引起血液运行不畅造成瘀血,瘀血内阻,脏腑功能失调。 瘀血既是病理产物,又是衰老病机之一,现代研究发现血瘀证大鼠模型体内超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶活性(glutathione peroxidase,GSH-PX)的含量降低,丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量升高,加重氧化应激[3]。 心为五脏六腑之主,心脏搏动,血液运行依赖心之统摄,衰老引发的心血管疾病是老年人常见疾病。

    川芎始载于《神农本草经》,其辛温而燥,能够活血行气、祛风止痛,为“血中之气药”。 现代研究表明川芎对心脑血管系统具有抗衰老、抗动脉粥样硬化、细胞保护、改善心功能等作用[4-6]。 但川芎辛温升散,久服易散真气,其小剂量下久服能否发挥抗氧化作用,并能否通过抑制氧化应激对心脏衰老具有保护作用还不明确。

    本实验通过构建衰老合并血瘀大鼠模型,观察川芎小剂量下久服抗氧化作用,基于Keap1-Nrf2-HO-1 抗氧化通路,探讨对衰老合并血瘀大鼠心脏保护作用及机制,为川芎合理用药提供依据。

    1 材料与方法

    1.1 动物

    SPF 级雄性SD 大鼠66 只,体质量180 ~220 g,购自斯贝福(北京)实验动物科技有限公司,许可证号:SCXK(京)2019-0010。 饲养于北京中医药大学动物房,大鼠自由饮水、摄食,12/12 小时日灯光模拟白天黑夜,以标准普通饲料喂食。 实验伦理号BUCM-4-2021032401-1052。

    1.2 药物

    D-半乳糖(批号:R24O11H128688,上海源叶生物有限公司);肾上腺素注射液(批号:2107262,天津金耀药业有限公司);维生素E 软胶囊(批号:210211,天津市中央药业有限公司);川芎配方颗粒(批号:2101006,北京康仁堂药业有限公司);人参配方颗粒(批号:21006942,北京康仁堂药业有限公司)。

    1.3 试剂与仪器

    SOD 试剂盒(批号:20220303)、GSH-PX 试剂盒(批号:20211123)及总抗氧化能力(total antioxidant capacity,T-AOC)试剂盒(批号:20211123)、MDA 试剂盒(批号:20220304)、总蛋白(total protein,TP)定量测定试剂盒(批号:20211223)、ATP 酶测试盒(批号:20220506),以上试剂盒均购自南京建成生物工程研究所;蛋白质羰基(protein carbonyl,PC)ELISA试剂盒(批号:202203),购自上海酶联生物科技有限公司;核因子E2 相关因子2(nuclearfactor erythroidderived 2-like 2,Nrf2)抗体(批号:00063558)、血红素加氧酶1(heme oxygenase 1,HO-1)抗体(批号:00105224)、Kelch 样 ECH 相关蛋白 1(recombinant kelch like ECH associated protein 1,Keap1)抗体(批号:00073992)、GAPDH 抗体(批号:10015666),购自美国Proteintech 公司 ......