李晗 宋玲 高云航 陈腾飞 侯红平 叶祖光 张广平

    肺纤维化是由多种因素所致严重的肺间质慢性疾病,为众多肺部疾病的最终表现结果。 该病早期以下呼吸道急性炎症反应为主,后期发展为成纤维细胞过度增殖与细胞外基质(extracellular matrixc,ECM)过量沉积,最终导致呼吸衰竭。 肺纤维化成因复杂,具体发病机制尚未完全阐明,因此该疾病也成为呼吸系统最严重疾病之一[1]。 当前研究发现肺泡上皮—间质转化( epithelialmesenchymal transition,EMT)是纤维化形成中的关键,因此有学者认为抑制EMT 是预防纤维化的有效手段[2-3]。 转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)是 EMT 过程的总开关,其可促进间质细胞的增殖和分化,促进ECM 的沉积,因此其被认为是最重要的致纤维化因子[4]。

    迄今,临床治疗肺纤维化多选用吡非尼酮、尼达尼布和糖皮质激,该药物虽能改善肺部炎症的发生与延缓纤维化进展,但均伴有严重的胃肠道副作用[5]。 如何利用传统中医理论和中药来治疗肺纤维化,已经成为科研人员关注的热点。 在中医古籍中并无“肺纤维化”的记载,但根据其临床症状,多将其归属于“肺痿”与“肺痹”的范畴,且病机主要为“气虚血瘀”,基本治疗方法则多采用益气活血法,选用黄芪丹参相伍,益气活血,补而不滞。 同时,本课题组前期发现,黄芪多糖(astragalus polysaccharides, APS) 与 丹 酚 酸 B(salvianolic acid B,Sal B)配伍具有改善博来霉素致大鼠肺纤维化的作用,且丹酚酸对TGF-β1 诱导的EMT 具有抑制作用[6]。 因此本研究在前期已确定黄芪多糖与丹酚酸B 具有抗PF 药效作用基础上,以人肺泡上皮细胞株A549 为研究对象,进一步揭示黄芪多糖与丹酚酸B 配伍对TGF-β1 诱导的肺上皮细胞间质转化的影响。

    1 材料与方法

    1.1 细胞株

    人肺泡上皮细胞A549 细胞株,购于北京协和医院研究所细胞库。

    1.2 药物与试剂

    黄芪多糖(上海赫澎科技生物公司,批号:HPBIO-B549);丹酚酸B(成都曼思特科技生物公司,批号:MUST-18070503);TGF-β1 人重组蛋白(美国Peprotech 公司,批号:081735);二甲基亚砜(美国Sigma 公司);1640 培养基(美国 Gibco 公司,批号:8119258);FBS 胎牛血清(美国 Gibco 公司,批号:2019-05-07);胰蛋白酶(上海Sangon Biotech 公司,批号:T1350);MTS 细胞存活率试剂盒(美国Promega 公司,批号:0000352619);人源纤连蛋白和人I 型胶原蛋白酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒(武汉华美生物科技有限公司,批号:J05037340、J23037588);RNA 提取试剂盒(北京天根生物有限公司,批号:U9019);反转录与real time PCR 试剂盒(北京全式金公司,批号:51219);Western blot 凝胶电泳配制试剂盒与BCA 蛋白定量试剂盒(北京康为世纪公司,批号:40415);一抗E-Cadherin 抗体(美国 Cell Signaling Technology 公司,批号:14472S),一抗α-SMA 抗体和Vimentin 抗体(英国Abcam 公司,批号: GR282976-35、 GR3186827-26); 二 抗 HRP-labeled Goat Anti-Rabbit IgG 抗体(上海碧云天生物技术有限公司,批号:A2016);其他化学与生物试剂均为国产分析纯 ......