女贞子多糖通过EGFR/MAPK 信号通路对卵巢癌细胞增殖、凋亡的影响
低剂量,1材料与方法,1药品和试剂,2主要仪器,3细胞来源,4细胞培养与分组,5MTT法检测HO8910细胞增殖,6流式细胞术检测HO8910细胞凋亡,7Westernblot检测HO89
袁小波 唐静卵巢癌是妇科肿瘤中危害最为严重的恶性肿瘤,严重危害女性的身体健康,该疾病早期难于诊断,病发后难于防治[1]。 目前主要通过手术治疗切除病灶,缓解肿瘤增生,但术后复发概率高[2]。因此,急需开发具有针对性的治疗药物,提高治疗效果,减少疾病复发。 女贞子多糖是木樨科植物女贞子的主要有效成分,其具有抗肿瘤作用[3]。据报道,女贞子多糖可抑制黑色素瘤细胞的粘附能力[4]。 但女贞子多糖对卵巢癌细胞恶性生物学行为的影响鲜有报道。 此外,表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)/有丝分裂原活性蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)通路是控制细胞生长过程中最重要的通路之一,可介导细胞的生长与分化,最终加速细胞增殖[5-6]。 相关研究表明,抑制EGFR/MAPK 信号通路可抑制卵巢癌细胞增殖、侵袭[7]。 而女贞子多糖能否通过调控EGFR/MAPK 信号通路影响卵巢癌细胞恶性生物学行为尚不明确。 因此,本研究主要探究女贞子多糖对卵巢癌细胞增殖、凋亡的影响以及其作用机制。
1 材料与方法
1.1 药品和试剂
女贞子多糖(批号:20180526)购于陕西鸿泽生物工程有限公司,胎牛血清(批号:20150410)购于普利莱(北京)基因技术有限公司,pcDNA3.1-EGFR及其对照品由吉玛生物科技有限公司合成,甲基噻唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)试剂盒(批号:20171107)购于上海纪宁生物科技有限公司,凋亡检测试剂(批号:20180923)购于翌圣生物科技有限公司,三磷酸甘油醛脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase, GAPDH) 抗 体 ( 批 号:20171011)、 EGFR 抗 体 (批 号:20161203)、 p-EGFR 抗体(批号:20170621)、p-P38 MAPK 抗体(批 号: 20190517)、 P38 MAPK 抗 体 ( 批 号:20180620)、B 细胞淋巴瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)抗体(批号:20190527)、Bcl-2 相关 X 蛋白(Bcl-2 associated X protein, Bax) 抗 体 (批 号:20171024)及免疫球蛋白G(immunoglobulin G,IgG)二抗(批号:20180925)购于abcam 公司 ......
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