庄文德 陈浩谚 陈振 肖增林 钟诚 郭浩华 晋大祥 丁平 谢炜星

    骨质疏松症是一种常发于中老年人群的系统性代谢性骨骼疾病,以骨骼质量下降,骨微结构破坏,易发骨折为主要特征[1]。我国流行病学调查显示65岁以上人群中32%的人群患有骨质疏松症,其中女性患者占51.6%,绝经后骨质疏松(postmenopausal osteoporosis,PMOP)广泛困扰着中老年女性人群。巴戟天具有温补肾阳,强壮筋骨的功用。现代药理学研究表明, 巴戟天具有抗骨质疏松、抗炎镇痛、抗衰老、抗氧化等作用[2]。既往研究表明巴戟天能够升高骨质疏松大鼠血清中骨保护素(osteoprotegerin,OPG)水平,同时降低核因子-κB受体活化因子配体(receptor activator of nuclear factor-κB ligand,RANKL)表达水平,调节OPG/RANKL信号轴维持骨稳态,调节破骨细胞,具有防治骨质疏松的作用[3-5]。然而,巴戟天中抗骨质疏松作用的有效成分仍不明确。巴戟天寡糖作为巴戟天主要的药效成分之一,其含量可占巴戟天药材干质量的10%以上[6],具有抗抑郁、抗痴呆、保护神经细胞、改善生育等多种药理作用[7]。但关于巴戟天寡糖对PMOP的防治作用目前尚未见报道。因此,本实验观察并比较巴戟天寡糖对PMOP模型大鼠的血清骨代谢标志物、骨微结构及骨组织结构参数的影响,初步探究其抗骨质疏松潜在机制,以期为巴戟天寡糖的临床应用及新药开发提供科学依据。

    1 材料和方法

    1.1实验动物

    采用3月龄SPF级雌性SD大鼠50只,体质量220～260 g,来源:广州中医药大学实验动物中心[许可证号:SYXK(粤)2018-0085]。所有大鼠均在动物房中饲养,保持大鼠生活环境的清洁、通风,12小时的光/暗周期,温度(24±2)℃,自由获取饲料和饮水。各组大鼠均存活,无一死亡,最终各组纳入大鼠均为10只。此次实验在广州中医药大学实验动物伦理委员会的批准及监督下进行。

    1.2实验药物

    本研究中实验药物为巴戟天寡糖,由广州中医药大学中药学院丁平教授制作提供。

    1.3主要试剂及仪器

    阿仑膦酸钠(上海麦克林有限公司,批号:C10663728);大鼠骨碱性磷酸酶(bone alkaline phosphatase,BALP)、Ⅰ型胶原氨基端延长肽(procollagen type 1 N-terminal propeptide,P1NP)、Ⅰ型胶原交联羧基末端肽(C-terminal telopeptide of type 1 collagen,CTX-1)、抗酒石酸酸性磷酸酶 (tartrate resistant acid phosphatase-5b,TRACP-5b)酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)试剂盒购自江苏酶免实业有限公司;BCA蛋白浓度测定试剂盒购自上海碧云天生物技术有限公司,货号:P0012;OPG、RANKL antibody购自南京巴傲得生物科技有限公司,货号:BS6684、BS72037;组织RNA提取试剂盒(Tissue RNA Purification Kit PLUS)、RNA逆转录试剂盒(Color Reverse Transcription Kit)、RNA扩增试剂盒(2×Color SYBR Green qPCR Master Mix)购自美国ZSCIENCE生物科技有限公司;SignalBoostTM免疫信号增强剂购自默克生命科学技术(南通)有限公司,货号: 407207等 ......