周云 张方 闫翠娜 李琪 乔宇 黄榕 翁志军 杨玲 刘慧荣

    肠易激综合征(irritable bowel syndrome,IBS)是常见的消化系统疾病,属全球流行性疾病,且患病率有逐年上升趋势。目前研究认为IBS主要与内脏高敏感、脑肠轴异常、肠道菌群失衡、生活与饮食习惯、基因易感性、社会心理因素等密切相关[1-2],其中内脏高敏感是研究热点[3]。内脏高敏感是指引起内脏疼痛或不适刺激的阈值降低,内脏组织对各种机械、化学等伤害性刺激反应强烈,包括内脏痛觉过敏、痛觉异常,扩张刺敏感性增强、反应性增加的现象,广泛存在于IBS患者中[4-5]。

    本课题组前期研究证实了针灸对IBS内脏痛存在较好的镇痛效果,涉及外周、中枢等多个层面[6-8],且针灸能通过调控外周嘌呤能配体门控离子通路3(purinergicligand-gatedionchannel 3,P2X3)受体的表达来降低IBS内脏高敏感[6-7];此外,也发现针灸能通过调节结肠黏膜的5-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)水平发挥减轻IBS内脏高敏感的现象[9]。而有研究发现5-HT的释放与P2X3受体相关[10-12],5-HT再摄取转运蛋白(serotonnin transporter,SERT)对控制胃肠道5-HT含量及其受体激活和脱敏又有重要作用,那么P2X3受体和SERT在针灸治疗IBS的作用机制中是否存在关系,成为一个新的需要解释的问题。因此,本研究将从电针调节IBS内脏痛大鼠外周机制上展开,探讨P2X3受体介导电针对IBS内脏痛大鼠结肠5-HT、SERT的调节作用,为进一步阐释针灸对IBS的作用机制提供更充分的实验依据。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物

    SPF级SD雄性大鼠,体质量140～160 g,由上海斯莱克实验动物有限责任公司提供,动物许可证号:SCXK(沪)2017-0005,饲养于上海中医药大学附属岳阳中西医结合医院实验动物中心。饲养环境:12小时昼夜节律交替,室温(20±2)℃,相对湿度50%～70%。适应性饲养一周后开始正式实验。

    1.2 伦理审查

    本研究所有动物实验均通过上海中医药大学附属岳阳中西医结合医院实验动物中心伦理审查(伦理号:PZSHUTCM190315009),整个实验过程严格按照我国实验动物管理规范执行。

    1.3 主要试剂与仪器

    戊巴比妥钠(P3761,美国Sigma);P2X3受体激动剂(M6517,美国Sigma);液体石蜡、氯化钠、氯化钾、无水乙醇、二甲苯、十二水合磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、多聚甲醛、中性树胶粘合剂(国药集团化学试剂有限公司);苏木精、伊红(南京建成生物工程研究所);5-HT ELISA检测试剂盒(ml003125-C,上海酶联生物科技有限公司);serotonin抗体(ab172884,英国abcam);GAPDH(2118S,美国CST);辣根过氧化物酶标记山羊抗兔IgG(H+L)(A0208,碧云天);SYBR Green PCR试剂盒(K0223,美国Thermo);逆转录试剂盒(K1622,美国Fermentas);一次性无菌针灸针(0.25 mm×13 mm,苏州医疗用品厂有限公司);韩式经穴刺激仪(南京济生医疗科技有限公司);光学显微镜(日本OLYMPUS公司);电泳仪、转印仪(美国Bio-RAD);ABI ViiA 7 Real Time PCR System(美国Applied Biosystems) ......