刘雪莹 付红娟 任彦蓉 齐文川 梁繁荣

    冠状动脉粥样硬化性心脏病(coronary heart disease, CHD)是由于冠状动脉粥样硬化导致心肌缺血、缺氧而引起以心绞痛、心律失常等为主要临床表现的疾病[1]。国内外众多研究证实针刺对缺血心肌具有保护作用[2-4]。临床治疗CHD心绞痛多选用心经、心包经穴位,其中内关穴使用频率最高。研究团队在前期临床试验中的研究表明CHD心绞痛患者会出现穴位敏化现象。穴位敏化是指机体在疾病状态下,阴平阳秘被打破,气血阴阳发生变化,腧穴由“沉寂态”变为“激活态”的过程,这跟机体的生理病理状态变化有关,能够实时和动态的反映脏腑的功能状态[5]。但目前关于穴位敏化的产生机制研究尚显不够。近年来差异表达基因研究被越来越多的应用于疾病机制的研究中,这也为穴位敏化发生的生物学机制研究提供了新的思路和平台[6-9]。本研究以穴位敏化理论为基础,通过转录组测序,筛选出CHD心绞痛模型大鼠敏化穴位组织中差异性表达的mRNA,并进行生物信息学分析,明确其生物学功能,从基因调控的角度研究参与穴位敏化发生过程的mRNA及其调控机制,为进一步研究穴位敏化现象提供科学依据。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物与分组

    健康SPF级雄性SD大鼠20只,6～8周龄,体质量(200±10)g,购于湖南斯莱克景达实验动物有限公司[生产许可证号:SCXK(湘)2019-0004],饲养于成都中医药大学针灸推拿学实验研究中心节律室,饲养条件为12小时明暗交替,室温16～28℃,湿度40%～70%。实验前适应性饲养1周,常规喂食标准饲料和自由饮水。按照随机数字表法将实验动物分为空白组(Cc组)、模型组(Tc组),每组10只。实验方案获得了成都中医药大学医学和实验动物伦理委员会的批准。

    1.2 主要仪器与试剂

    主要仪器:PowerLab多导生理记录仪(澳大利亚AD Instruments公司),电子测痛仪Electric VonFrey(美国 IITC Life Science Inc公司),转轮式切片机(徐卡RM2016,德国LEICA公司),高速低温组织研磨仪(武汉赛维尔生物科技有限公司),干浴器干式恒温金属浴(上海达洛科学仪器有限公司),Bio-rad-CFX96、LineGene9600均购于杭州博日科技有限公司,QuantStudio 5 Real-Time PCR System(美国应用生物系统公司)。

    主要试剂:Isofluranee(深圳市瑞沃德生命科技有限公司),10%中性甲醛固定液(福晨化学试剂有限公司),二甲苯(成都市科隆化学有限公司),苏木素染液、伊红染液均购于珠海贝索生物技术有限公司,中性树胶(Biosharp生物公司),Animal Total RNA Isolation Kit、2×RT OR-EasyTM Mix、2×Real PCR EasyTM Mix-SYBR均购于成都福际生物技术有限公司 ......