林青 刘艳霞 佟庆 陈雨 颜芳 邢玉

    多囊卵巢综合征(polycystic ovarian syndrome,PCOS)是一种以内分泌紊乱为主、多种代谢异常导致的异质性临床综合征,因其发病机制始终尚未明确,该病一直是妇科临床的难点重点。中医药治疗PCOS疗效突出,国医大师柴嵩岩治疗本病颇有心得,其自拟方“归术益坤方”已通过临床试验[1]证实,该方对于改善PCOS患者相关症状效果明确。本课题组前期研究通过大鼠及细胞实验证实,归术益坤方可以影响卵巢颗粒细胞自噬,发挥治疗效果[2],但该方对于PCOS的具体治疗机制尚不明确,需进一步细化。归术益坤方中多味中药被证实对于肠道菌群调控具有一定影响,本实验复制来曲唑诱导的大鼠模型,以归术益坤方进行干预,观察中药对PCOS大鼠体质量、卵巢大小及形态、血清睾酮、空腹血糖、脂多糖(ipopolysaccharide,LPS)、相关炎症因子、卵巢组织中Toll样受体4(toll like receptor-4,TLR-4)表达的影响,研究归术益坤方通过调控LPS/TLR-4通路治疗PCOS的潜在机制。

    1 材料与方法

    1.1 动物

    SPF级6周龄雌性SD大鼠18只,体质量(180±15)g,北京维通利华实验动物技术有限公司提供,动物许可证号:SCXK(京)2016-0006。常规饲养于北京中医药大学SPF级屏障环境,12小时光照/黑夜循环,温度25 ℃,湿度60%,自由摄食饮水。本研究已通过北京中医药大学动物实验伦理委员会审查,伦理审查批号:BUCM-4-2018101001-4030。

    1.2 实验药物、主要试剂与仪器

    归术益坤方颗粒剂(菟丝子20 g、白术15 g、当归15 g、南沙参12 g、车前子15 g、茜草12 g、丝瓜络10 g、浙贝母10 g),购于北京中医药大学东方医院,常规开水冲泡,制成药液每mL含3 g颗粒剂;来曲唑片,江苏恒瑞医药股份有限公司,批号:190316KG,将来曲唑溶于1%羧甲基纤维素(carboxylmethyl cellulose,CMC)溶液中,每mL含0.5 mg来曲唑药粉。

    血清睾酮(testosterone,T)测定试剂盒(北京北方生物技术研究所,批号:20190602);白细胞介素-18(interleukin-18,IL-18)酶联免疫试剂盒(南京建成生物工程研究所,批号:20190404);肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)酶联免疫试剂盒(南京建成生物工程研究所,批号:20190410);LPS酶联免疫试剂盒(上海赫澎生物科技有限公司,批号:HPBIO-Elisa711);血糖酶法试剂盒(北京百奥泰康生物技术有限公司,批号:DL201901) ......