魏玥 付长庚 李洪峥 杨文文 彭煜暄 路爱梅 龙霖梓 曲华 于子凯

    动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)是一种常见的动脉内膜炎症性疾病,内膜炎症反应的严重程度决定着AS的进展和转归[1]。巨噬细胞是AS斑块中主要的炎性细胞,可在AS微环境因素的影响下极化为功能相反的两种表型,即M1型和M2型,二者极化失衡可促进AS的炎症持续状态,进而加重AS[2]。研究表明,M1型巨噬细胞可通过分泌促炎因子加剧炎症反应,加速AS的形成;而M2型巨噬细胞具有抗炎作用,可促进组织修复,延缓AS的进展,因此,调控二者极化平衡对防治AS具有重要意义[3-4]。

    三七总皂苷(panax notoginseng saponins,PNS)是活血化瘀类中药三七的主要有效成分,PNS制剂被广泛用于心血管疾病的临床治疗[5]。既往研究显示,PNS具有降低血脂水平、抑制炎症反应、抑制心肌细胞凋亡等作用[6-7]。团队前期研究表明,PNS可通过降脂稳斑、抗炎等起到抗AS作用,但其是否能够通过调控巨噬细胞极化抗AS值得进一步研究[8-9]。基于此,本研究拟选用ApoE-/-小鼠构建AS模型,探讨PNS通过调控巨噬细胞极化防治AS的潜在机制。

    1 材料与方法

    1.1 动物与饲料

    SPF级雄性ApoE-/-小鼠53只,同品系雄性C57BL/6J小鼠13只,6周龄,体质量20～24 g,购自北京维通利华实验动物技术有限公司,合格证号:SCXK(京)2021-0006。实验所需基础饲料和高脂饲料均购自小黍有泰(北京)生物科技有限公司,许可证号为SCXK(京)2018-0006。高脂饲料由83.5%基础饲料+15%猪油+1.5%胆固醇构成。本实验通过中国中医科学院西苑医院动物伦理委员会批准(批件号:2022XLC047-2)。

    1.2 实验药物

    三七总皂苷购自昆药集团股份有限公司(主要含三七皂苷 R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1及人参皂苷Rd等成分;标准品化学纯度:86%),批号JK12022029;辛伐他汀片,购自华润双鹤利民药业(济南)有限公司,批号2104439。

    1.3 主要实验试剂

    肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白介素-6(interleukin-6,IL-6)酶联免疫吸附剂测定法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测试剂盒(联科生物,货号分别为A282H20841、A206H20131);油红染液、苏木精-伊红(hematoxylin-eosin staining,HE)染液、多聚甲醛固定液(武汉赛维尔生物科技有限公司,货号分别为:G1015、G1003、G1101);RNA提取液、2×SYBR Green qPCR Master Mix (None ROX)(武汉赛维尔生物科技有限公司,货号分别为G3013、G3320);引物序列由武汉赛维尔生物科技有限公司合成 ......