陈源 吴悠 吴丽丽 秦灵灵 刘铜华

    糖尿病是一类以高血糖和糖脂代谢障碍为特征的代谢性疾病,中医认为其核心病机为“阴虚燥热”[1-2]。滋肾丸是一首中医经典名方,方中只有知母、黄柏、肉桂三味药,常用于淋证、癃闭等肾系疾病。方中知母、黄柏滋阴清热,肉桂反佐,基本符合糖尿病病机。前期动物实验已经证实滋肾丸具有一定的降糖效果,如郭晓媛[3]用滋肾丸醇提取物对db/db小鼠干预四周后空腹血糖(fasting blood glucose,FBG)水平开始下降,并能减轻糖尿病肾病肾小管早期肾损害,改善肾功能。Tang等[4]将db/db小鼠分成滋肾丸三个剂量组,发现其显著降低小鼠血糖及糖化血红蛋白水平,并改善其糖耐量,其降糖效果可与罗格列酮不相上下。实验室前期研究发现滋肾丸可通过增加Occludin和ZO-1蛋白在肠道中的表达来增强肠道屏障功能和降低全身炎症,改善骨骼肌形态,调节骨骼肌胰岛素信号通路[5]。肝脏也是胰岛素的重要靶器官之一,本研究将基于肝脏胰岛素通路,进一步验证其在自发性糖尿病动物模型KKay小鼠中的降糖作用,以及探讨其改善肝脏胰岛素抵抗的机制。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物

    KKay小鼠21只,5周龄;C57BL/6J小鼠7只,5周龄,由北京华阜康生物科学有限公司提供,饲养于北京中医药大学SPF级动物房,室温(25±2)℃,相对湿度(50±5)%,昼夜循环12小时/12小时人工光照条件下,自由饮水,正常维持饲料喂养。普通饲料为小鼠全价营养颗粒饲料,KKay小鼠专用高脂饲料由北京华阜康生物科学公司提供(货号:1042)。

    1.2 伦理审查

    本研究的动物实验经北京中医药大学动物伦理委员会批准(伦理号:BUCM-4-2019031003-1089)。

    1.3 实验药物

    知母、黄柏、肉桂中药饮片购买于北京同仁堂制药公司。

    滋肾丸水提物提取:将中药饮片知母300 g、黄柏300 g、肉桂45 g混合,浸泡在10倍药重的蒸馏水中1小时,煮沸45分钟后收集药液。再次加入相同体积的水煮沸45分钟,将两次的煎剂一起放入旋转蒸发仪中浓缩至645 mL,得到1g/mL浸膏。将浓缩的浸膏分装收集在50 mL的EP管中并保存在-20℃冰箱中,每次灌胃前纯水稀释。

    1.4 实验仪器与试剂

    便携式血糖仪(GLUCOCARD 01-min plus,日本爱科来医疗科技有限公司,型号:GT-1970);酶联免疫检测仪(美国,Promega,型号:E9032);凝胶成像系统(美国,Bio-RAD公司,型号:ChemiDocTMXRS);研磨仪(上海净信科技有限公司,型号:JXFSTPRP-24);实时荧光定量PCR仪(美国,Thermo Fisher Scientific,型号:7500);台式高速冷冻离心机(美国Sigma Aldrich公司,型号:3K15);紫外分光光度计(瑞士梅特勒-托利多国际有限公司,型号:UV5Nano) ......