洪译 王真权 罗雯鹏

    溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)是以弥漫性、连续性病变为特征的慢性非特异性炎症性疾病,属于炎症性肠病范畴[1]。该病全球发病率逐年上升[2],已成为临床较难治愈的常见消化道疾病之一。针对UC的病因及发病机制仍未达成共识,目前已提出包括遗传、免疫学失调、微生物群失衡和环境触发等多种致病因素,其中较为公认的是与免疫功能障碍失调相关的免疫学说。

    中医并无与UC相对应病名,临床根据患者症状分为“泄泻”“肠澼”等病。中医认为,UC病位在大肠,与脾胃、肝、肺等多脏腑相关。脾虚湿热蕴肠为基本病机,本虚标实为病性特点。多由饮食不节、外感六淫、情志失调[3]或禀赋不足所致。临床诊疗中发现大多UC发病与中医“湿热[4]”“瘀血[5]”“浊毒[6]” 等病理因素相关。

    复方芩柏颗粒是我院多年来临床治疗UC的纯中药制剂,疗效确切,在防治UC的发生发展方面有其独特优势。前期已有研究显示,复方芩柏颗粒具有较强的抑菌抗炎作用,能够有效增强机体免疫力,且无明显毒副作用[7]。同时复方芩柏颗粒可促进UC大鼠肠道黏膜愈合,减轻肠道炎症反应,其机制可能是通过上调转化生长因子β1(transforming growth factor 1, TGF-β1)表达,调控辅助性T细胞(helper T cell)17/调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)细胞稳态平衡,并与用药浓度相关。该结果提示 Th17/Treg 可能是复方芩柏颗粒治疗 UC 的重要靶点[8-10]。本研究旨在证实复方芩柏颗粒对UC大鼠Th1/Th2、Th17/Treg细胞稳态的调节作用,探讨复方芩柏颗粒对溃疡性结肠炎的治疗机制。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物

    雄性SD大鼠42只(动物质量合格证编号:422023100001662),SPF级,6～7周龄,体质量(230±15)g,购于湖北贝恩特生物科技有限公司,许可证号:SCXK(鄂)2021-0027,本次实验已通过动物实验伦理审查[编号:LACUC(准)- BNT-2022-002]。大鼠饲养于SPF级环境,饲养室温度(22±3)℃,相对湿度 50%～60%,12小时明暗交替,实验前适应性喂养7天。

    1.2 实验药物、试剂及仪器

    复方芩柏颗粒,组成:黄柏、槟榔、秦艽、防风炒炭、熟大黄、生地黄、当归尾、桃仁、延胡索、黄芩、泽泻,药物比例:黄柏∶黄芩∶泽泻∶当归∶槟榔∶秦艽∶防风∶熟大黄∶延胡索∶生地黄∶桃仁=4∶4∶4∶4∶3.5∶3.5∶3.5∶3.5∶3.5∶5∶2,规格:6 g/包,批号:湘药制字Z20080819,湖南中医药大学第二附属医院提供;美沙拉嗪肠溶片(黑龙江天宏药业股份有限公司生产,批号:20190109);葡聚糖酸钠(dextran sulfate,DSS)(Sigma,批号:PHL83846);粪便隐血检测试剂(远慕生物,批号YM-TC0511),二甲苯(国药,批号:10023418);无水乙醇(国药,批号:10009259);苏木素—伊红染液(三鹰,批号:B600020);CD4流式抗体(biolegend,批号:201505);干扰素γ(interferon-γ,IFN-γ)流式抗体(Cell Signaling,批号:62675S);白介素(interleukin,IL)-4流式抗体(biolegend,批号:511905);IL-17A流式抗体(Invitrogen,批号:12717781);CD25流式抗体(biolegend,批号:202113);叉头状转录因子3(forkhead box protein P3,FoxP3)流式抗体(biolegend,批号:320007);荧光定量PCR MasterMix(TSINGKE,批号:TSK201);BCA蛋白定量试剂盒(碧云天,批号:P0009);ECL底物发光试剂盒(武汉聚能译通,批号:K-12043-D10);SDS聚丙烯酰胺分离胶(Solarbio,批号:S8010);HRP标记山羊抗兔(武汉三鹰,批号:SA00001-2);HRP标记山羊抗小鼠(武汉三鹰,批号:SA00001-1) ......