孕16~28周胎儿脐血β-地中海贫血基因及其血红蛋白电泳\红细胞参数变异分析(2)
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1.2.4 数据分析数据均以均数±标准差(x±s)形式表示，用SPSS 13.0统计分析软件进行 t检验，P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 脐血β-地贫基因异常型别及其红细胞参数及血红蛋白电泳结果
对210例胎儿脐血标本进行血红蛋白电泳、血常规及β-地中海贫血基因检测，异常基因型有30例。用反向斑点杂交法检测β-地中海贫血患者的基因突变型，共检出10种突变类型，主要以41-42M/N，654 M/N，17M/N，-28M/N等4 种突变为主。其中β-地中海贫血轻型22例，β-地中海贫血中间型7例，β-地中海贫血重型1例，正常对照组180例。另有2例结果特殊，1例反向斑点杂交检测β-地中海贫血正常(N/N)但血红蛋白A[HbA(%)]异常低，另1例反向斑点杂交检测β-地中海贫血为41-42M/N，但MCV(fl)异常高。30例脐血β-地中海贫血基因异常型别及其红细胞参数及血红蛋白电泳结果见表1，以HbA(%)数值由低到高排列。
2.2 4 组样本中红细胞参数及血红蛋白电泳结果
对4组样本的血常规参数进行比较，对照组MCV、MCH、MCHC 与其他各组结果对比差异无统计学意义(P>0.05)；但HbA(%)在其他组间的结果均低于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。4 组样本中红细胞参数及血红蛋白电泳结果见表2 。
3 讨论
地中海贫血是一组常染色体不完全显性遗传性慢性溶血性疾病，其主要发病机制是α珠蛋白肽链与β珠蛋白肽链合成速率的不平衡，从而引起溶血性贫血[2]。其中，β-地中海贫血是由于基因组中β珠蛋白基因突变导致β珠蛋白肽链缺如(β0)或合成不足(β+)所致[3]。对孕期夫妇进行轻型地贫筛查，对高危患者进行产前诊断，对减少重型地贫儿的出生率，降低围生儿病死率，提高人口素质具有重要意义[4]。
人类血红蛋白由珠蛋白按四级结构和血红素合成，珠蛋白肽链有6种，分别命名为：α、β、γ、δ、ε、ζ链。α链有141个氨基酸残基，α和ζ珠蛋白基因相互临近，组成“α”基因簇，位于16号染色体短臂上。β、γ、δ、ε珠蛋白基因相互临近，组成“β”基因簇，位于11号染色体短臂上。β链有146个氨基酸残基。从胚胎期开始先有α链和γ链合成并迅速达到高峰，β链孕3～5月开始合成，到妊娠末期合成上升[5]。基因决定了胎儿血红蛋白成分与成人不同。在诊断β-地中海贫血时，胎儿脐血血红蛋白电泳结果要注意分析HbA(α2β2)值，而在成人要特别注意HbA2(α2δ2)值的不同。在产前诊断实施过程中，有多种方法可应用，其中毛细管血红蛋白电泳有非常重要的作用，能够准确定量检测HbA(α2β2)和HbF(α2γ2)等多种血红蛋白含量，精确度高。16～28孕周胎儿脐血血红蛋白成分为HbA(α2β2) 和HbF(α2γ2)，毛细管血红蛋白电泳可将地中海贫血进行初步分为α-地中海贫血和β-地中海贫血，可以有效地筛查出高危地中海贫血。毛细管血红蛋白电泳同时还可筛查出各种异常血红蛋白，如HbH、HbE、HbG等，为进一步进行基因诊断和遗传咨询提供基础[6]。
虽然血常规检测对成人检测地中海贫血有很好筛查作用，有报道MCV对地贫的筛查准确率为90.23%[7]，但在胎儿脐血标本中，从本资料实验结果看，MCV在β-地中海贫血各基因型间无明显差异，这和胎儿脐血中HbF(α2γ2)占(94.5±1.3)%的组成成分是相关的。β-地中海贫血以突变为主，缺失少见，目前全世界已发现200多种突变，在中国人群中已发现约30种[8]。本文使用诊断试剂由深圳益生堂公司提供，可检测中国人常见17种突变。本文279 例胎儿脐血标本中检出10种突变类型，其中多为41-42M/N，654 M/N，17M/N，-28M/N4 种突变，突变类型的发生频率与报道相同。
为了更好确诊地中海贫血，笔者建议多种检查联合诊断，胎儿脐血血常规检测虽然在诊断β-地中海贫血无优势，但在α-地中海贫血诊断中作用明显，另文叙述。毛细管血红蛋白电泳及反向斑点杂交法测定脐血β-地中海贫血基因在产前诊断β-地中海贫血方面都能取得较好的效果，且具有良好的相互验证及补充诊断作用。本资料所有确诊的β-地中海贫血基因突变类型中HbA均值为(2.7±0.7)%，明显小于正常胎儿脐血标本均值(5.5±1.3)%。而β-地中海贫血突变纯合子、β-地中海贫血突变多点杂合子HbA均值则为0.4%和(0.8±0.8)%。在笔者实际临床工作中也发现2例特殊患者，1例为反向斑点杂交法检测胎儿脐血β-地中海贫血基因正常而毛细管血红蛋白电泳HbA值为1.5%。其母亲β-地中海贫血基因正常但有明显贫血症状，笔者认为这应是反向斑点杂交法检测的17种以外的型别，因条件所限未作进一步检测。另1例β-地中海贫血基因型为41-42M/N(排除α-地中海贫血)，但HbA值高达5.2% MCV值高达145.0 fl，胎儿有严重贫血症状，此结果待进一步研究。
[参考文献]
[1]杜传书.地中海贫血研究的现状与未来[J].中华医学遗传学杂志,1996, 13(5):256-257.
[2]Weatherall DJ,Clegg JB.The Thalassemia Syndrome[M].3 rded.Oxford:Blackwell Scientific Publication,1981:450 ......
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