caspase-8在卡铂诱导人食管鳞癌细胞凋亡中的作用研究
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1.2.4 Western blotting检测各组细胞中caspase-8蛋白表达分别收集实验中各组细胞，提取细胞总蛋白，用考马斯亮蓝试剂盒检测蛋白浓度，调整样本浓度基本一致后进行蛋白变性处理。将蛋白样本进行SDS-PAGE凝胶电泳，半干法转膜至PVDF膜上，5%脱脂奶粉室温封闭2 h，用兔抗人caspase-8单克隆抗体和β-actin单克隆抗体孵育，4℃过夜。TBST 洗膜后再加入辣根过氧化物(HRP)标记羊抗兔IgG(1∶1 000)，室温孵育2 h。洗膜后用化学发光底物显影，凝胶图象处理系统软件分析目的条带的灰度值。以目的蛋白的灰度值与β-actin的灰度值的比值表示各目的蛋白相对表达水平，设对照组值为1，实验组与对照组比较，得出相对值，进行统计学分析。
1.3统计学处理
该实验重复3次，计量资料以x±s表示，采用SPSS 13.0软件分析处理实验所得数据，统计学方法采用t检验，P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 卡铂对食管鳞癌细胞凋亡的影响
实验结果显示，对照组Eca-109、TE-1、TE-10细胞凋亡率非常低，在实验组中加入40 μg/ml卡铂作用24 h后，Eca-109、TE-1、TE-10细胞凋亡率均显著升高(表1)，与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)(图1)。
2.2 卡铂对食管鳞癌细胞表达caspase-8 mRNA的影响
结果显示，对照组Eca-109、TE-1及TE-10细胞中caspase-8的mRNA呈低水平表达，各实验组中Eca-109、TE-1及TE-10细胞表达caspase-8 mRNA水平均有明显升高(图2)，与对照组具有显著差异(图3)。
2.3 卡铂对食管鳞癌细胞表达caspase-8 蛋白的影响
对照组Eca-109、TE-1及TE-10细胞均表达caspase-8蛋白，实验组Eca-109、TE-1及TE-10细胞表达caspase-8蛋白水平显著升高(图4)，与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05，图5)。
3讨论
很多临床研究结果都已经表明铂类制剂在食管癌的化疗中具有重要的价值，而卡铂作为第二代铂类制剂也被广泛应用于食管癌的临床化疗[12]。笔者的实验结果表明，40 μg/ml的卡铂能明显诱导人食管鳞癌细胞株Eca-109、TE-1及TE-10凋亡，表明卡铂可能主要通过诱导食管鳞癌细胞凋亡达到治疗食管鳞癌的目的。
研究已经证实，caspase-8在食管鳞癌组织中呈低表达，而在高、中分化鳞癌中的表达率高于低分化鳞癌[13-14]，这表明caspase-8的表达水平与食管鳞癌的预后相关。笔者通过实验证实，在给予卡铂处理24 h后的食管鳞癌细胞凋亡率显著升高，同时细胞中caspase-8蛋白及mRNA的表达水平均显著升高。由此我们可以推测，卡铂可能通过改变食管鳞癌细胞中caspase-8的表达，诱导食管鳞癌细胞凋亡，这可能是卡铂治疗食管鳞癌的重要分子机制。同时我们还推测，是否可以通过改变食管鳞癌细胞中caspase-8的表达，遏制食管鳞癌的生长和转移，达到治疗食管鳞癌的目的。对于术前化疗的食管鳞癌患者，化疗和手术前后检测caspase-8的表达水平，或许可以早期判断食管鳞癌的预后，重新选择个体敏感的治疗方案。
由于食管鳞癌的治疗是一个综合治疗的过程，个体差异非常显著，目前卡铂在食管鳞癌的临床治疗中也显现出一定的实用价值[15]，但仍无法彻底改变食管鳞癌的预后。对于caspase-8能否作为食管鳞癌分子靶向治疗的目标，还需要进一步研究证实。
[参考文献]
[1]Kim T,Grobmyer SR,Smith R,et al. Esophageal cancer-the five year survivors[J].J Surg Oncol,2011,103(2):179-183.
[2]Shahbaz Sarwar CM, Luketich JD, Landreneau RJ, et al. Esophageal cancer: an update[J].Int J Surg,2010,8(6):417-422.
[3]Wang SH,Li XW,Chen YQ, et al.Effect of NF-κB inhibitor on apoptosis induced by carboplatin in ovarian cancer cell[J].The Practical Journal of Cancer,2009,24(6):560-562.
[4]Wu J, Yan YN, Zhang Y, et al. Effects of antiox idant pyrrolidine dithiocarbamate on the prolifera tion and apoptosis of cervical cancer HeLa cells[J] ......
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