冷沉淀在不同温度不同时间放置对Ⅷ因子的影响
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[摘要] 目的 探讨制备冷沉淀的不同时间及不同温度对Ⅷ因子的影响，为制备冷沉淀选择最佳时间、温度和指导临床输注发挥作用。 方法 随机抽取6 h内制备成的新鲜冰冻血浆(FFP)200 mL/袋的A与B，用离心法制备成冷沉淀20～25 mL，各自分别抽取2 mL放入5个不同编码的无菌试管内。A组(A1、A2、A3、A4、A5)于24℃室温放置，B组(B1、B2、B3、B4、B5)于4℃放置，AB两组分别在0、3、5、7、9 h观察测定。 结果 冷沉淀主要含Ⅷ因子、纤维蛋白原、VWF、第Ⅴ因子以及纤维结合蛋白等，但主要成分是Ⅷ因子，其稳定性差，在24℃的室温和4℃放置，随时间变化而变化。 结论 控制制备时间、温度和临床使用冷沉淀的放置时间、融解时间及温度、运输过程冷链、确保血液成分有效，对减少血液浪费十分重要。
[关键词] 冷沉淀；制备；时间；温度；Ⅷ因子
[中图分类号] R457 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721(2012)12(c)-0090-02
冷沉淀是200 mL全血分离的新鲜冰冻血浆(FFP)100 mL，制备成的白色絮状物，20～30 mL为1个单位，内含Ⅷ因子≥40 IU/U，纤维蛋白原≥75 mg/U。自采血日起有效期1年。冷沉淀用于预防和治疗出血及凝血功能障碍疾病，包括甲型血友病、血管性假性血友病、先天性或获得性纤维蛋白原缺乏症及第Ⅷ因子缺乏症等[1-2]。
1 仪器与方法
1.1 仪器
美国贝克曼J6-MA大型低温离心机、韩国产摇摆式低温融化箱CT-4T6C、-53℃低温速冻机，-30℃血浆保存机、37℃恒温水浴箱、无菌接驳机、热合机、日本制造自动凝血因子检测仪(CA-50)、成都协和生物技术中心生产的凝血因子促凝性检测试剂。
1.2 方法
3 讨论
A组(A1、A2、A3、A4、A5)和B组(B1、B2、B3、B4、B5)各自是同源血分出的冷沉淀，每组在相同温度、不同时间段检测冷沉淀Ⅷ因子变化更具有指导意义。冷沉淀Ⅷ因子极不稳定，在室温24℃和在4℃放置3 h后Ⅷ因子减弱都明显。因此，笔者认为制备时无论是在室温24℃，还是在4℃，融化箱都要控制制备时间小于3 h，这样冷沉淀Ⅷ因子减弱少 。水浴离心法100 mL/袋的新鲜冰冻血浆最好在2 h内完成制备；200 mL/袋的新鲜冰冻血浆，在2 h 30 min内完成制备，并及时放入速冻机速冻，-30℃保存。本站目前冷沉淀的发放量增长迅速，有时甚至供不应求。为满足临床需要，保证冷沉淀的质量，采取的措施包括：选择健康的献血者，做好采血前采中的护理，采血400 mL在6 min内完成，采血200 mL在3 min内完成，减少采血时血流不畅针头堵塞，影响制备的冷沉淀质量。如果外出采血就及时把血放入4～6℃容器内贮存。采血后在6 h内完成制备成新鲜冰冻血浆(FFP)。制备新鲜冰冻血浆的离心条件是：转速3 800 r/min，时间13 min，温度4℃，刹车档4，离心机预温，保证血液在离心机时温度在2～4℃，离心后轻轻垂直取出，放在分浆夹分出上层血浆，血浆经两次离心后摆平摆疏放入-53℃速冻机，-30℃保存。新鲜冰冻血浆制备冷沉淀时，融化箱内加入圆形冰块，并用手不停旋转，加快冰溶解速度，当温度达到8℃时，取出冰块，放入提前5 min从-30℃冰箱取出的新鲜冰冻血浆，融化箱内温度保持4℃，并专人监测箱内温度变化。夏天，南方温度较高，融化箱内温度间中超过4℃时，及时放回装有冰块的篮子，使温度控制在4℃。离心机预温要达到0℃。融化箱内的血浆大约融化到一半时用手轻轻地捏碎，有少量冰渣时，工作人员相互合作， 快速装杯、平衡、离心。离心条件：转速4 200 r/min，温度0℃，时间10 min，刹车档为4。从离心机轻轻垂直取出，移去上面血浆，血袋底下剩20～30 mL白色絮状物，为冷沉淀。迅速放入-53℃速冻。冷沉淀制备从开始到最后入库速冻，都是多人共同完成。缩短了冷沉淀制备时间，包括在室温、融化箱、离心机的时间，保障了冷沉淀在室温和4℃放置的质量。贴标签时少量取出，并用大毛巾覆盖，避免了冷沉淀自然溶解导致的Ⅷ因子减弱；血库发血和运输按要求控制好冷链，特别是离血站路途遥运的山区医疗单位，运送时用隔热泡沫塑料箱[3-4]，封闭包装，防止冷气外漏，造成冷沉淀溶解，不能输注，浪费血液；指导临床用冷沉淀时，冷沉淀在水浴箱的温度不能超过37℃。温度超过37℃，会破坏所有凝血因子和蛋白质[5-6]。融化时间7～ 8min，融化后尽快输注，确实无法及时输注的在4℃放置，时间不超过3 h，融化后不用的不冻结再用，在临床输注上，时常出现融化后的冷沉淀因输注不及时而作为失效血液废弃对血液资源造成浪费[7-8]。本站通过从采血开始到把血液运送到医疗单位，再到输注，对各个环节的温度、时间、量等有效控制，毎月质控抽检依据 GB-18469-2012《全血及成份血质量的要求》，合格率从2011年开始达到98%以上。冷沉淀由于使用方便、效果好，临床上应用越来越广泛，在术后出、DIC、严重创伤的替代治疗，也适用于严重感染，烧伤、白血病和肝功能衰竭方面的疾病的治疗，并取得良好效果。由于冷沉淀制作简单疗效好，本站不断探索与实践，提高了冷沉淀抽检合格率和临床输注效果。
[参考文献]
[1] 黄春霞. 浅谈血液制品冷沉淀在临床上的应用前景[J]. 中国现代药物应用，2012，6(16)：38-40.
[2] 庄文，陈镇奇. 献血与输血及临床应用[M]. 北京：中国科学技术出版社，2008：149.
[3] 庄文，苏玲玲. 献血与输血[M]. 北京：中国科学技术出版社，2001：104.
[4] 苏红 ......
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