杨国栋 赵乐▲

    河南科技大学第一附属医院，洛阳471003

    M uc15基因在卵巢癌组织中的表达及其与临床病理因素之间的关系

    杨国栋 赵乐▲

    河南科技大学第一附属医院，洛阳471003

    目的检测Muc15基因在卵巢癌组织中的表达情况及其在卵巢癌组织发生、发展中所起的作用。方法应用Western blot、RT-PCR技术检测本院2012年9月～2014年3月收治的65例正常卵巢组织、30例良性卵巢肿瘤组织及65例卵巢癌组织中Muc15蛋白相对表达量及mRNA相对表达量，分析其在三种组织中表达的差异。结果Muc15蛋白相对表达量、mRNA相对表达量在正常卵巢组织、良性卵巢肿瘤组织及卵巢癌组织中比较差异有统计学意义(P1 资料与方法

    1.1 一般资料

    收集本院2012年9月～2014年3月手术切除卵巢癌新鲜组织标本65例，年龄43～68岁，中位年龄56.4岁；组织学分期Ⅰ期16例、Ⅱ期21例、Ⅲ期28例；有淋巴转移者39例，无淋巴转移者26例。另同时收集卵巢良性肿瘤30例及正常卵巢组织65例，所有患者术前均未接受过放疗和化疗及等其他治疗，均经病理证实。

    1.2 方法

    1.2.1 卵巢组织Muc15 Wes ter n b l o t检测①蛋白提取：从液氮中取适量组织标本于匀浆器中，按照蛋白提取试剂盒的说明提取蛋白，BCA法测定其蛋白浓度。②电泳：取蛋白60μg及等量上样缓冲液95℃5min后冷却上样，进行电泳。③转膜及封闭：经10% SDS-PAGE凝胶电泳后转移至硝酸纤维素膜上，加封闭液及一抗(1︰500稀释)4℃过夜，TBST洗涤4次，10 min/次，将膜与HRP标记的二抗(1︰5000稀释)室温孵育2 h，TBST洗涤4次，10 min/次。④蛋白检测：将显影液加到膜上，曝光显影，用Band Scan图像分析系统进行分析。

    1.2.2 卵巢组织Muc15 RNA提取及RT-PCR①总RNA的提取：严格按照RNA提取试剂盒的操作步骤提取总RNA。②cDNA的制备：二步法PCR试剂盒逆转录cDNA。③RT-PCR方法：扩增Muc15mRNA，反应结束后，取5μl产物进行电泳 ......