Rab27A和Rab27B在4种不同人肝癌细胞株中的表达(2)

http://www.100md.com 2015年6月5日 中国当代医药2015年第16期

     1.2.3 Western blot SDS-PAGE分离蛋白，每个样品的上样量为50 μg，电转至NC膜。5%脱脂牛奶4℃封闭1 h，孵育一抗Rab27A(1∶1000稀释)或Rab27B(1∶1200稀释)，4℃过夜。倒掉一抗溶液，用TBST漂洗液滤膜3次，每次10 min。加入相应种属的辣根过氧化物酶标记的二抗溶液(1∶10 000稀释)，摇床上缓慢摇动，37℃ 2 h。倒掉二抗溶液，用TBST漂洗液滤膜3次，每次10 min。最后采用ECL试剂盒显影，定影，观察杂交信号。

    1.3统计学方法

    采用SPSS 17.0统计软件进行数据处理，计数资料以率表示，采用χ2检验。以P < 0.05为差异有统计学意义。

    2 结果

    通过采用RT-PCR、Western blot分析了3种人肝癌及1种人永生化肝细胞系中Rab27A及Rab27B mRNA及蛋白表达情况。β-actin内参条带在205 bp处皆显现明亮且无明显差异，Rab27A mRNA在357 bp处3种人肝癌细胞系中明显亮于1种人永生化肝细胞系；Rab27B mRNA在302 bp处均出现目的条带 ......