1.2 抗hNGF单克隆抗体的制备

    1.2.1 BALB/c小鼠免疫 选取5只雌性BALB/c小鼠，将重组人神经生长因子抗原与弗氏完全佐剂混合，乳化完全后皮下注射，每只小鼠的免疫剂量为80 μg。首次免疫后，间隔2周及3周，将rhNGF抗原与弗式不完全佐剂进行乳化后重复免疫2次，小鼠尾部取血，测血清效价，选取效价高的小鼠进行融合试验。融合前3 d，腹腔加强免疫1次。

    1.2.2 细胞融合及杂交瘤细胞筛选 超净台内无菌环境下取免疫BALB/c小鼠的脾脏研磨制成脾细胞悬液，用RPMI 1640培养基洗涤2次，收取1×108脾细胞与2×107～5×107骨髓瘤细胞SP2/0混合于一支50 ml融合管中，补加RPMI 1640培养基至30 ml，充分混匀。1000 r/min离心10 min，将上清尽量吸净。在手掌上轻击融合管底，使沉淀细胞松散均匀。用1 ml吸管在1min左右加预热至37℃的50% PEG 2000(pH=8.0)1 ml，边加边轻轻转动，肉眼可见有颗粒出现，缓慢加入RPMI 1640培养基至20 ml ......