反相高效液相色谱法同时测定茶碱和多索茶碱的血药浓度(2)
2.2标准溶液的制备精密称取氨茶碱对照品10.1 mg 、多索茶碱对照品10.1 mg,置于10 ml 容量瓶中,用甲醇溶解并稀释至刻度,制成10.10 μg/ml的对照品储备液;另精密称取咖啡因对照品10 mg,置于100 ml 容量瓶中,加甲醇溶解至刻度,得浓度为100 μg/ml的内标溶液。以上样品均置于4℃的冰箱保存备用。
2.3血浆样品的处理
取血浆0.35 ml,置于1.5 ml的EP管中,加入内标溶液25 μl,再加入甲醇溶液1.1 ml,涡旋振荡1 min,以10 000 r/min离心10 min,取上清液10 μl进样。
2.4色谱行为
空白血样、空白血样中加入对照品和内标血样经HPLC分析得到色谱图(图1)。茶碱、多索茶碱和内标的保留时间分别为7.1、13.8、9.6 min,基线平稳,峰形良好,无杂质峰干扰。提示本方法具有较高特异性,能够准确测定血浆中茶碱和多索茶碱的浓度。
2.5线性范围与最低检测限
用空白血浆将茶碱对照品和多索茶碱对照品溶液稀释成不同浓度(1.05 ......
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