①精液标本用生理盐水调整浓度为500～1000万/ml(密度为100×106左右，一般为90 μl生理盐水+10 μl精液)。②溶液A溶解(90～100℃)5 min，放置在37℃恒温箱5 min，加入30 μl精液混合。③20 μl琼脂糖精液加入到玻片上，盖上盖玻片，放置在4℃冰箱5 min。④从冰箱中取出后，立即放入溶液B(母液1 ml加入9 ml蒸馏水混匀，重复使用。)中7 min，放入溶液C(一次性使用)10 ml中25 min，然后分别浸入蒸馏水中1 min、75%乙醇5～8 min、100%乙醇1 min，取出后自然晾干。⑤染色：加溶液D 10滴染色2 min，加溶液E 10滴染色10 min(期间充分混匀)，自来水下冲洗5 s，自然晾干后400倍镜下观察500个精子涂片形态[4]。

    1.3观察指标及判定标准和计算方法

    观察指标：①精液常规参数，包含精子浓度、精子正常形态率、前向精子百分率、总活力[5]。②体外受精(IVF)受精结局，包含受精率、卵裂率、优质胚胎率；③妊娠结局，包含生化妊娠率、临床妊娠率[6]。计算方法：①2PN受精率=2PN受精卵数/MII卵数×100%[7]。②2PN卵裂率=2PN卵裂数/2PN受精卵数×100%[8]。③优质胚胎率=优质胚胎数/2PN受精卵数×100%[9] ......