栀子叶乙醇提取物对B16黑色素瘤细胞黑色素生成及酪氨酸酶活性的影响
1材料与方法,1材料及仪器,2细胞培养,3栀子叶有效成分的提取方法,4实验分组,5采用左旋多巴氧化法检测酪氨酸酶活性,6MTS测定细胞活力,7B16黑色素瘤细胞黑色素含量的测定,8B16黑色素
黄 硕 刘 风厦门市第五医院麻醉科,福建厦门 361101
近年来,由各种原因引起的色斑、皮肤衰老等问题受到人们越来越多的关注,而黑色素过度沉着是导致皮肤出现色斑的主要原因[1]。黑素细胞中的酪氨酸酶调控黑色素的生成[2],同时也是生物体合成黑色素起始反应过程中最重要的限速酶[3],因此,许多皮肤美白剂通过抑制酪氨酸酶活性抑制黑色素的生成来达到美白的功能[4]。由于天然产物具有安全、温和、环保等优点[5],因而从天然植物中提取功效成分以改善皮肤色素沉积,已成为目前护肤产品开发的主要趋势[6]。
栀子叶来源于茜草科植物栀子(Fructus Gardeniae)的干燥叶[7]。栀子分布于我国海拔10~1500 m 处的旷野、丘陵、山谷、山坡、溪边的灌丛或林中[8],其果实已收入《中国药典》并广泛应用于临床[9]。而其叶在我国广西、四川等地民间广泛应用于治疗烫伤、跌打损伤、血瘀等[10]。有报道称,栀子叶含去羟栀子苷、栀子苷[11-12]。但到目前为止,国内外对该属植物的药理研究还不够系统和深入,栀子叶中有效成分的药理学作用尚未充分揭示。本实验通过检测栀子叶70%乙醇提取物对α-促黑色素细胞激素(α-MSH)诱导的B16黑色素瘤细胞增殖活性、细胞内酪氨酸酶活性及黑色素生成的作用,期望为栀子叶美白护肤功效产品的开发提供理论依据,现报道如下。
1 材料与方法
1.1 材料及仪器
1.1.1 材料 栀子叶由厦门鹭燕大药房有限公司提供,经厦门市第五医院药剂科鉴定为茜草科植物栀子(Fructus Gardeniae) 的干燥叶,自然阴干后粉碎,过20 目筛,4℃储藏备用。曲酸、二甲基亚砜、左旋多巴(L-DOPA)、α-MSH 均购自美国Sigma 公司。胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)、DMEM 培养基、青链霉素、胰蛋白酶(含0.02% EDTA)(购于Gibco 公司)。1.1.2 仪器 3111型CO2培养箱(美国Thermo 公司);Spectra Max M5型多功能酶标仪(美国Molecular Devices 公司);FD-1A-50型冷冻干燥机(上海继谱电子科技有限公司);旋转蒸发仪(德国Heidolph 公司)
1.2 细胞培养
B16黑色素瘤细胞购自于中科院上海细胞所 ......
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