益气清毒消瘤方诱导肠癌细胞凋亡的机制研究
含药,1材料与方法,1实验资料,2细胞培养及传代,3细胞增殖抑制试验(MTT法),4细胞凋亡的形态观察,5流式细胞仪(FCM)检测,6统计学方法,2结果,1各组培养12,24,48h后的OD值和抑制率的比较,2各组细胞
唐晓玲 郭 健 熊林楷 王利勤 熊墨年1.江西省中医药研究院恶性肿瘤益气清毒重点研究室,江西南昌 330046;2.南昌大学第一附属医院中医科,江西南昌330006;3.江西省肿瘤医院内二科,江西南昌 330029;4.江西省中医药研究院,江西南昌 330046
大肠癌是目前威胁人类健康与生命安全的恶性疾病之一,具有较高的发病率[1],且早期发病隐匿,加之目前我国国民体检及胃肠道筛查普及率不高,多数肠癌患者确诊时已是中晚期[2],错过最佳手术时机,并且放化疗除具有较严重的毒副反应外,长时间应用还易导致患者不耐受及耐药等情况,限制了临床的应用[3]。近年来,中医药在各种恶性疾病的治疗中扮演重要角色,成为临床应用及研究的重点和热点[4]。益气清毒法是熊墨年教授基于祖国医学“邪之所凑,其气必虚”和“积之成也,正气不足,而后邪气踞之”理论,在长期的肿瘤临床诊疗与科研实践中形成并提出的治疗肿瘤的学术思想。本研究主要针对益气清毒消瘤方含药血清对大肠癌细胞生长的抑制作用,初步分析其诱导肠癌细胞凋亡的机制,现报道如下。
1 材料与方法
1.1 实验资料
1.1.1 主要仪器和试剂 激光流式细胞仪、激光共聚焦显微镜、凝胶成像仪均购自Olympus 公司,电泳仪购自北京六一公司;RPMI1640 培养基、单克隆Bcl-2 抗体、单克隆Bax 抗体、单克隆Fas 抗体均购自abcam公司。
1.1.2 益气清毒消瘤方药物制备 太子参15 g,白术15 g、茯苓15 g、甘草6 g、黄芪20 g、白花蛇舌草30 g、半枝莲30 g、藤梨根20 g、败酱草15 g、地榆15 g、枳壳10 g、莪术10 g,加水煎煮1 h,煎液浓缩至1.3 g/mL 生药,冰箱冷藏保存备用。
1.1.3 含药血清制备 本研究经过动物伦理委员会审核同意。采用清洁级18~22 g 雄性昆明小鼠40 只(南昌大学医学部实验动物中心,动物合格证号:190608),随机分为高、中、低剂量组和对照组,每组各10 只,对照组给予0.2 mL的生理盐水,高、中、低剂量组给药量分别为13 g 生药/kg 体重、6.5 g 生药/kg 体重、3.25 g生药/kg 体重,4 组小鼠均灌胃给药3 d ......
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