李远志 王钧冬 岳朝驰 龙 庆 李 俊

    1.西南医科大学临床医学院 西南医科大学附属医院中医科，四川泸州 646000；2.成都中医药大学附属医院脾胃病科，四川成都 610000

    结肠癌是全球第三大常见的恶性肿瘤和第四大癌症死亡原因[1]。目前结肠癌的主要治疗方式是手术辅以放疗或化疗，然而患者的5年生存率仅为65.2%[2]，表明目前的治疗方法无法根除癌细胞。因此，急需寻找新的治疗结肠癌的有效方法。中药半枝莲的主要活性成分野黄芩苷，是一种主要由肽多糖等构成的黄酮类化合物，具有抗肿瘤的作用[3-4]。野黄芩素作为野黄芩苷的苷元，更易吸收，生物活性更高，生物利用度更好[5]，但其抗结肠癌作用及相关机制报道较少。因此，本研究拟探索野黄芩素在结肠癌发生、发展中的作用及其相关机制，为野黄芩素在临床治疗结肠癌提供可靠依据。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 细胞系及实验动物 人结肠癌细胞系T84 购买于上海北诺生物科技有限公司；15 只雄性无胸腺BALB/C 裸鼠，SPF 级，5～6 周龄，体重18～20 g，购买于成都达硕实验动物有限公司，动物生产许可证号：SCXK(川)2020-030。裸鼠饲养于屏障系统中，12 h 明暗周期自动交替，采取自由采食，自由饮水的方式喂养。本实验已报备医院动物伦理委员会批准通过。

    1.1.2 主要试剂及耗材 本研究所需要的试剂及耗材购买均来源于北京傲锐东源生物科技有限公司。

    1.2 方法

    1.2.1 药品制备 将野黄芩素溶于二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide，DMSO)中，制成100 mM 的母液备用。

    1.2.2 细胞培养 T84 细胞培养于含5%胎牛血清、2.5 mM 谷氨酰胺的DMEM/F12 培养基中，培养箱环境设置为温度37℃，CO2浓度5%，间隔一天更换细胞液直至细胞融合度达到80%～90%后进行细胞传代。

    1.2.3 细胞转染 在转染之前的24 h，按照密度为5×105/mL 的标准在24 孔培养瓶中进行细胞接种，采用脂质体lipofectamine 2000 将对照载体和表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor ......