王 悦 孟湃喆 于艳红▲

    1.沈阳市第十人民医院结核病实验室，辽宁沈阳 110044；2.沈阳市医学院医学检验技术专业，辽宁沈阳 110034

    结核病(tuberculosis，TB)位居全球单一致死性传染病的首位，每年约有50 万利福平耐药病例，其中78%为耐多药结核病(multidrug-resistant tuberculosis，MDR-TB)[1]。我国是全球耐药结核病负担最大的三个国家之一[2-3]。由于传统的药敏试验方法费时、繁琐，无法满足快速临床诊断的要求[4-5]，许多快捷高效的分子技术已更多应用于TB 检测，包括荧光PCR熔解曲线法、线性探针耐药检测法或DNA 微阵列等。荧光PCR熔解曲线技术特点是在扩增完成后增加了熔解曲线的分析过程，比较样本与阳性对照间熔点差异(△Tm值)。该技术对rpoB基因与利福平耐药相关81bp 进行突变检测；对与异烟肼耐药相关的ahpC启动子、inhA94 密码子、inhA启动子以及katG315 密码子的相关位点进行特异检测。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 研究对象 回顾性分析2019年7月—2020年7月沈阳市第十人民医院收取的254 例痰样本检验结果，三项检测为同一患者的同一样本，排除标准为治疗超过2 周的患者。以MGIT 960 药敏试验为参考标准，探讨熔解曲线技术在结核病耐药诊断中的应用价值，并采用线性探针耐药检测技术对不一致结果进行复检。本研究经过沈阳市第十人民医院医学伦理委员会审核批准。

    1.1.2 主要仪器及试剂 Bio-Rad CFX96 实时荧光PCR 扩增仪(Bio-Rad Laboratories)；Lab-Aid 824 核酸提取仪、结核分枝杆菌利福平/异烟肼耐药突变检测试剂盒(厦门致善生物科技股份有限公司)；MGIT 960 全自动结核分枝杆菌快速培养法仪及配套试剂(Becton ......