罗红梅 杨中州 单丛佳

    1.广东医科大学生理科学实验室，广东东莞 523808；2.南京大学模式动物研究所，江苏南京 210028

    磷酸肌醇依赖性蛋白激酶-1(phosphoinositidedependent protein kinase-1，PDK1)为63 kD 的蛋白分子，是体内重要的激酶，调节多条信号通路蛋白磷酸化， 参与诸多细胞因子信号由细胞外向细胞内转导。PDK1结构包括C-端的PH 结构和N-端的催化结构，其第241 位的蛋白分子可自身磷酸化，其他位点例如第9、373/376 位点的蛋白分子也可以被磷酸化，磷酸化后的PDK1被激活[1-2]。PDK1被证明参与心脏发育和结构功能维持的调控， 生殖细胞水平敲除PDK1导致由神经脊细胞来源的组织发育缺陷， 例如没有前脑、鳃弓和心脏等的发育[3]。 用不同的cre 条件性地敲除小鼠心脏中的PDK1， 心脏发育表现出不同的时空差异， 也就是说在不同的时间和不同的心脏部位敲除PDK1，小鼠心脏发育出现不同的表型。 例如用Tie2-cre 敲除内皮细胞中的PDK1，小鼠在胚胎期第11.5 天死亡，小鼠心脏房室轴(artrioventricular canal，AVC)明显发育不良[4]。 用Mef2c-cre 敲除心脏中第二心场(second heart field，SHF) 的PDK1， 小鼠在胚胎期第14.5 天死亡，心脏表现为右心室很小，室间隔缺损和流出道不分割[5-6]。 同源盒转录因子Nkx2.5是调控心脏发育的关键转录因子之一，研究表明Nkx2.5可通过调控MLC2V、N-myc、Tgfb-2、Fulin 等下游基因或者协同其他心脏转录因子GATA4，TBX1等调控心脏的生长发育和功能维持[7-8]，PDK1是否受Nkx2.5的调控以及该调控在心脏发育中是否起作用， 目前尚无相关报道。 本研究用Nkx2.5-cre 条件性敲除小鼠心脏中的PDK1，探索研究Nkx2.5对PDK1调控的时空差异，以及与先天性心脏病的关系。

    小鼠心脏(outflow tract，OFT)、AVC 以及瓣膜的形成大致经历三个阶段，心胶组织的形成，心内膜垫的形成和瓣膜成熟[7]，小鼠心胶组织从胚胎第9.5 天开始生长发育，由心管(也称第一心肠，first heart field，FHF)内、外两层之间的心内膜细胞分泌的含有丰富糖蛋白的物质形成[9-10]。 接着心胶组织内迁入大量的细胞形成心内膜垫，迁入的细胞有第二心场来源的心内膜细胞(endocardium cell ......