126例梗阻性无精子症借助ICSI治疗的临床结局分析(2)
参见附件。
1.3.2 TESA 消毒麻醉同PESA操作，术者左手固定睾丸，绷紧阴囊皮肤，用7号静脉头皮针连接5 ml注射器，预先抽吸少量培养液，在睾丸中部无血管区进针，保持针尖在睾丸组织内并做来回穿刺动作，助手与术者来回穿刺动作同步抽吸5 ml注射器，直至术者感觉头皮针阻力较大时，保持注射器负压抽出带有曲细精管的针尖，并用显微镊子尽可能拔出更多的曲细精管，按压穿刺点2 min，助手将曲细精管挑入预置培养液的培养皿中，洗去红细胞，在解剖显微镜下用两个无菌BD注射器将曲细精管撕碎，在倒置显微镜下检测精子情况。
1.4 精子悬液的制备
1.4.1 附睾精子的处理 将穿刺所得附睾液加入离心管，操作时应尽可能不打混精液与离心液的界面，尽可能避免将附睾液中的红细胞混入沉渣里，以防影响随后的ICSI操作。然后用适量G-IVF液( Vitro life, Sweden )冲洗盛有附睾液的小皿，再缓缓加入离心管，尽可能获得多的精子，1500转/min，15 min。弃上清，将沉渣用巴士德吸管转入洗精液里，1500转/min，5 min。由于附睾穿刺获得的精子数量和活力都有限，且直接行ICSI治疗，因而不需上游。洗涤后即可备用。制作ICSI操作皿，放入37 ℃、6.5% CO2培养箱内孵育，待行ICSI。
1.4.2 睾丸精子的处理 先准备一个小皿，用针头在小皿上交叉划出很细密的凹槽。将穿刺出的睾丸组织放在划有凹槽的小皿上，用适量G-IVF液(Vitro life, Sweden)培养液浸润。再用两个带针头的注射器，一个按住曲精小管，将曲精小管压在预先划好的小凹槽上，同时用另一个注射器的针头把取精小管划开，再把曲精小管里的内容物往外挤。再在显微镜下观察挤出的内容物中有无精子，若没有或者较少可以再次挤压或者打磨，直到在显微镜下看到足量精子。使用悬液制作ICSI操作皿，放入37 ℃、6.5% CO2培养箱内孵育,待行ICSI。
1.5 受精、胚胎评估和胚胎移植 按照Palermoetal的方法选择MII卵子行ICSI，16～18 h观察受精，正常受精可观察到双原核和两个清晰或碎裂的极体 ......
1.3.2 TESA 消毒麻醉同PESA操作，术者左手固定睾丸，绷紧阴囊皮肤，用7号静脉头皮针连接5 ml注射器，预先抽吸少量培养液，在睾丸中部无血管区进针，保持针尖在睾丸组织内并做来回穿刺动作，助手与术者来回穿刺动作同步抽吸5 ml注射器，直至术者感觉头皮针阻力较大时，保持注射器负压抽出带有曲细精管的针尖，并用显微镊子尽可能拔出更多的曲细精管，按压穿刺点2 min，助手将曲细精管挑入预置培养液的培养皿中，洗去红细胞，在解剖显微镜下用两个无菌BD注射器将曲细精管撕碎，在倒置显微镜下检测精子情况。
1.4 精子悬液的制备
1.4.1 附睾精子的处理 将穿刺所得附睾液加入离心管，操作时应尽可能不打混精液与离心液的界面，尽可能避免将附睾液中的红细胞混入沉渣里，以防影响随后的ICSI操作。然后用适量G-IVF液( Vitro life, Sweden )冲洗盛有附睾液的小皿，再缓缓加入离心管，尽可能获得多的精子，1500转/min，15 min。弃上清，将沉渣用巴士德吸管转入洗精液里，1500转/min，5 min。由于附睾穿刺获得的精子数量和活力都有限，且直接行ICSI治疗，因而不需上游。洗涤后即可备用。制作ICSI操作皿，放入37 ℃、6.5% CO2培养箱内孵育，待行ICSI。
1.4.2 睾丸精子的处理 先准备一个小皿，用针头在小皿上交叉划出很细密的凹槽。将穿刺出的睾丸组织放在划有凹槽的小皿上，用适量G-IVF液(Vitro life, Sweden)培养液浸润。再用两个带针头的注射器，一个按住曲精小管，将曲精小管压在预先划好的小凹槽上，同时用另一个注射器的针头把取精小管划开，再把曲精小管里的内容物往外挤。再在显微镜下观察挤出的内容物中有无精子，若没有或者较少可以再次挤压或者打磨，直到在显微镜下看到足量精子。使用悬液制作ICSI操作皿，放入37 ℃、6.5% CO2培养箱内孵育,待行ICSI。
1.5 受精、胚胎评估和胚胎移植 按照Palermoetal的方法选择MII卵子行ICSI，16～18 h观察受精，正常受精可观察到双原核和两个清晰或碎裂的极体 ......
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