大鼠慢性脑低灌注模型再灌注脑组织HIF-1α\VEGF表达的意义(2)
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1.2 脑皮层血流灌注量检测 将麻醉后的大鼠固定于脑立体定位仪上开颅，颅骨窗位于冠状缝和人字缝之间，大小约5 mm×6 mm。于再灌注前即刻(R0)为基础状态、再灌注1 h(R1)、24 h(R2)及72 h(R3)时点，各组随机取6只大鼠，采用PeriScan PIM 3激光多普勒血流灌注成像仪(Perimed公司，瑞典)，以低功率激光束连续扫描已暴露的脑窗皮层测量区域和矢状缝中点左右方各1.5 mm点。LDPI激光波长为670 nm，采用NR扫描模式，步长3 mm，扫描头高度在15～30 cm，扫描面积4 cm×4 cm，记录扫描到的面积血流灌注量和目标点血流灌注量。测量数值单位为PU(Perfusion Unit)，其值越大代表皮层血流及灌注越强。检测数据及图像直接储存在电脑硬盘，应用LDPI win 3.1软件分析，处理结果导入Excel 2000 用于对比分析[5,6]。
1.3 荧光RT-PCR检测HIF-1α、VEGF-mRNA表达 取各组大鼠右侧半球额顶区皮质，约1 mm×1 mm×2 mm大小。按Trizol试剂说明提取组织总RNA；使用逆转录试剂盒(Promega公司)，按操作说明合成cDNA；以cDNA为模板进行PCR扩增。HIF-1α引物：上游5' tatctgaaagccctggatgg 3'，下游5' tgggccatttctgtgtgtaa 3'； VEGF 引物：上游5' gcccatgaagtggtgaagtt 3'，下游5' actccagggcttcattattg 3'。RT-PCR操作按试剂盒说明进行。PCR条件：95 ℃ 1 min，60 ℃ 1.5 min，72 ℃ 3 min，40个循环后，72 ℃延伸15 min。PCR产物以荧光TaqMan的方法检测 ......
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