中间层在成釉细胞分泌期的矿化相关因子表达研究(2)
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参见附件。
1.3 矿化相关信号分子在小鼠牙釉质形成初期表达的组织学定位与观察 采用免疫组化PV二步法对TNSALP、E-cad、OC、BSP、OPN、DMP-1、FM、BGN和DCN的表达进行组织学定位。取出生后7 d和13 d小鼠磨牙的标本,二甲苯脱蜡,梯度水化至水,3%过氧化氢室温孵育5 min,以阻断内源性过氧化物酶,复合消化液消化5 min,蒸馏水洗,血清封闭,室温孵育20 min,不洗,滴加一抗(FM、BGN和DCN为1:2000,其他为1:100稀释)37 ℃孵育1 h,PBS漂洗,羊抗鼠IgG抗体-HRP多聚体,37 ℃孵育20 min,PBS漂洗,DAB溶液显色,蒸馏水冲洗,苏木素复染,中性树胶封片,显微镜下观察并照相。阴性对照片用PBS分别代替一抗或二抗,以成骨肉瘤组织作阳性对照。
1.4 结果判定标准 根据本研究实验结果结合文献设定标准如下:(1)阴性表达(-):细胞质内无淡黄色及棕黄色颗粒,苏木素复染后呈蓝色者。(2)弱阳性表达(+):细胞质内淡黄色,或阳性着色低于该组织结构的10%。(3)阳性表达(++)细胞质内淡黄或棕黄色颗粒占该组织结构的10%~60%,染色清晰。(4)强阳性表达(+++):细胞质内淡黄或棕黄色颗粒占该组织结构的60%以上,染色强。
2 结果
2.1 釉质分泌期的中间层组织学观察 中间层的发育过程自成釉器分化为内釉上皮、中间层、星网状层和外釉上皮四层结构开始,伴随内釉上皮分化为成釉细胞和成釉细胞的分泌过程,到釉质分泌完成后逐渐消失。从开始的2~3层细胞结构到单细胞结构;从细胞排列紧密,与周围组织界线清楚到细胞排列疏松,与周围组织界线逐渐不清,不易辨认。具体见图1。
图中A:出生后1 d的小鼠牙胚成釉器已分化为内釉上皮、中间层、星网状层和外釉上皮四层结构。可见内釉上皮呈柱状或高柱状,釉牙本质界限清楚,中间层为2~3层细胞组成的条带结构,胞核明显,呈椭圆形。其外周为疏松的星网状层。B:出生后3 d,内釉上皮分化为高柱状的成釉细胞,可见釉质和牙本质分泌,紧邻成釉细胞的中间层结构清楚,由1~2层细胞组成,细胞之间连接紧密,星网状层结构开始萎缩 ......
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