孕妇感染HCMV时IgG抗体亲和力与HCMVDNA联合检测的临床意义(2)
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1 资料与方法
1.1 一般资料 选择2010年5月-2012年7月在昆明市延安医院进行检查的门诊孕妇341例。应用定量ELISA技术检测其HCMV-IgM及HCMV-IgG抗体,根据检测结果及妊娠史将之分为初次妊娠孕妇组(237例)及孕产史不良孕妇组(104例)。104例孕产史不良妇女中,习惯性流产47例,胚胎停止发育38例,胎儿畸形6例,死胎11例,智力低下儿2例。根据HCMV-IgG或IgM抗体测定结果又分为四组:A组IgM(-)/IgG(+);B组IgM(+)/IgG(+);C组IgM(+)/IgG(-);D组IgM(-)/IgG(-)。
1.2 标本采集与保存 所用孕产妇均为空腹静脉采血。抗体检测抽血4~5 ml,2 h内分离血清。-18~-20 ℃保存备用,一周内完成检测。HCMV-DNA检测抽血1 ml,EDTA抗凝,当天完成检测。所有检测由专人完成。
1.3 HCMV抗体定量检测及亲和力检测 采用定量ELISA技术检测孕妇血清中HCMV的IgM和IgG抗体、IgG亲和力试剂。试剂为德国Virion/serion(维润赛润)有限公司产品。酶标仪为美国BioRad公司产品。酶标检测定量判断软件由德国维润赛润公司提供。操作严格按照试剂说明书进行操作,每批样本检测均进行室内质控。质控品与样本同时检测,室内质控每次检测在控。
1.3.1 HCMV抗体阳性判断临界值 CMV-IgM为10~15 U/ml;CMV-IgG为25~40 U/ml;低于临界值下限的判断为阴性,高于临界值上限的判为阳性。并对可疑样本进行核实复查。
1.3.2 HCMV抗体亲和力指数的测定 通过上述检测判定为IgG阳性的血清样本,进行亲和力检测。根据维润赛润公司提供的软件计算样本的AI值。AI<45%为低亲和力抗体,表示原发性感染(少于4周)。AI介于45%~55%为中等亲和力抗体,AI>55%为高亲和力抗体,后两者提示既往HCMV感染(包括病毒再感染)。
1.4 FQ-PCR检测血清HCMV DNA 采用RV核酸扩增(PCR)荧光定量检测。试剂为中山医科大学达安基因公司产品。检测仪器为ABI prism 7000型核酸扩增实时荧光检测仪。操作严格按照试剂说明书提取DNA及PCR扩增。每次试验严格按照试剂盒提供的阳性标准品做标准曲线,试验设阴性、阳性及空白对照。
1.5 统计学处理 采用SPSS 17.0软件对数据进行统计学处理,多组样本间采用 字2检验进行比较,检验水准α=0.05。
2 结果
2.1 各组间 HCMV IgG亲和力指数检测结果见表1。
167例初次妊娠孕妇与95例孕产史不良孕妇抗体亲和力检测结果如表1所示,经 字2检验,HCMV-IgG低亲和力样本孕产史不良孕妇所占比例显著高于初次妊娠孕妇,差异有统计学意义( 字2=10.229,P<0.05)。初次妊娠A组中164例全为高亲和力样本,提示HCMV隐性感染。B组中3例样本中1例为低亲和力抗体,提示原发感染,2例为高亲和力抗体提示与继发感染有关。孕产史不良孕妇A组5例(6.25%)HCMV-IgG阳性患者为低亲和力抗体,提示HCMV原发感染后期。B组3例(20%)样本为低亲和力抗体,提示存在原发感染;4例样本为中等亲和力抗体,提示1-3月内的既往原发感染;8例样本为高亲和力抗体样本,提示与继发感染有关。
2.2 各组间HCMV-DNA检测结果见表2。
237例初次妊娠孕妇与104例孕产史不良孕妇HCMV-DNA检测结果如表2所示,经 字2检验,孕产史不良孕妇阳性例数所占比例显著高于初次妊娠孕妇,差异有统计学意义( 字2=60.567,P<0.05)。237例初次妊娠组中,有2例HCMV-DNA阳性。104例孕产史不良组中,有36例HCMV-DNA阳性均提示胎儿有感染风险。孕产史不良D组中,1例样本HCMV-DNA阳性,提示患者可能处于HCMV感染窗口期,抗体还未出现,但HCMV-DNA已可检测出。孕产史不良B组中,亲和力试验表明15例样本中有7例存在原发感染及1~3月内的既往原发感染,但HCMV-DNA中有9例样本阳性,表明继发感染中可能存在新毒株再次感染使HCMV-DNA可被检出。
3 讨论
我国孕妇中HCMV-IgG抗体阳性率高达80%~100%,孕妇感染HCMV可发生在妊娠的各个时期,可由原发感染和继发感染引起。以往HCMV-IgM一直被认为是HCMV活动性感染与潜伏性感染的评价指标[1]。本文中,对HCMV的原发与继发性感染进行了评估,目前检测HCMV-IgG亲和力广泛应用的检测方法即亲和力试剂法[2]。本文通过检测HCMV-IgM/IgG先筛选出341名孕妇,分组后通过检测IgG抗体亲和力指数评估两组孕妇HCMV的原发性感染及继发感染情况,同时对两组孕妇的血样进行HCMV-DNA检测,用以评估胎儿的感染风险 ......
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