雄黄对MRL/lpr狼疮小鼠抗ds—DNA抗体和T细胞表面分子CD69、CD25表达的影响(3)
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3 讨论
系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus，SLE)是一种典型的自身免疫性疾病，其临床特征是产生大量自身抗体和多系统、器官受累。世界范围内SLE的发病率约为50/10万，我国约为70/10万，高于日本等其他东亚国家[7]。该病女性发病率较男性高，比例约为9：1，且多见于育龄期妇女。SLE的病因和发病机制至今尚未完全阐明，一般认为是多因素性的，涉及遗传因素(如染色体畸变、基因突变、染色体数目异常等)、环境因素(如紫外线，化学因素、饮食因素、感染因素和过敏原等)等。他们错综复杂的交互作用可引起机体免疫功能的紊乱，产生多种免疫异常，如自身反应性T、B淋巴细胞的过度激活、细胞因子分泌异常和细胞凋亡紊乱等，导致大量致病性自身抗体和免疫复合物的产生，沉积于组织器官而引发相应的病理损害。
MRL/lpr小鼠是SLE模型之一，由于存在凋亡基因的缺陷导致自身反应性淋巴细胞凋亡异常，产生自身抗体。与人类SLE相似，该小鼠均产生针对包括抗ds-DNA抗体在内的高水平IgG型自身抗体，且可能在SLE活动时通过循环和原位免疫复合物在肾小球沉积而介导肾炎[8]。因此，控制这些抗体的分泌成为治疗SLE的重要靶点之一。
目前，抗ds-DNA抗体是SLE活动性的重要指标[9]。本实验结果显示，MRL/lpr小鼠经雄黄低中高三个剂量组治疗3个月后，血清抗ds-DNA抗体比治疗前和对照组明显下降。通过统计分析其具体数据，笔者发现，雄黄治疗90 d时，高、中剂量两治疗组已经低于对照组，但低剂量组差异不显著，据此可推测，90 d时高、中剂量两组的雄黄已开始起效。180 d时，高中低剂量治疗组的抗ds-DNA抗体水平都进一步下降，且与对照组之间差异均有统计学意义，因此，笔者可以认为，一般剂量的雄黄至少要经过三个月以上的治疗，才能抑制MRL/lpr小鼠血清中抗ds-DNA抗体的表达。另外，实验各组治疗前后小鼠体重稳定，可推测雄黄对其食欲、能量代谢并无明显影响。据此可认为，雄黄能抑制MRL/lpr小鼠自身免疫反应，从而缓解SLE病情和延长其生存时间。
现有的研究已经明确，T细胞针对自身抗原的反应是由于对这些自身抗原结构的免疫耐受的破坏。凋亡细胞的清除障碍、感染微生物的持续存在及某些药物都可以导致免疫耐受的破坏。致病性自身抗原达到一定浓度，以及调节性和杀伤性T细胞的功能缺陷等遗传因素和感染、药物等环境因素的共同作用，可导致机体对自身抗原的耐受丧失，出现自身抗原特异性T细胞，并辅助B细胞产生自身抗体。随着抗原表位扩展，B细胞产生大量的IgG致病性自身抗体，引起LN的发病和SLE的其他症状[10]。CD69是目前已知的T细胞活化后表达最早的一个表面分子，在多克隆刺激剂作用下迅速表达，发生从2%～98%的大幅度变化[11]。而CD25是白细胞介素2受体(IL-2R)α链，是T细胞中期活化抗原，静止T细胞表达很少，活化后则大量诱导表达，与IL-2Rβ、IL-2Rγ链共同构成高亲和力的IL-2R，以供IL-2结合并选择性支持经抗原刺激而活化的T细胞进行扩增[12]。笔者用ConA来刺激T淋巴细胞表达CD69、CD25。实验结果表明，雄黄各浓度组对经ConA刺激48 h后T淋巴细胞CD25、CD69的表达均有明显抑制作用，其差异有统计学意义(P<0.05)。
本研究结果还表明，180 d时雄黄治疗各组MRL/lpr小鼠生存时间比对照组明显延长，差异有统计学意义(P<0.05)，提示雄黄对MRL/lpr小鼠确实可能有治疗作用，但其作用机制是多方面，有待更深入的研究。
总之，根据本实验的结果可以认为，雄黄能抑制MRL/lpr小鼠T细胞表面的CD69和CD25表达，降低血清抗ds-DNA，缓解自身免疫，延缓疾病进程，延长生存时间。本研究为中药雄黄治疗系统性红斑狼疮提供了可靠的实验依据。下一步还需通过实验研究雄黄通过干预哪条何种细胞信号转导通路途径而抑制CD69和CD25的表达，以便更加全面地了解该药的具体治疗机制。
参考文献
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[9] Bengtsson A，Nezlin R，Shoenfeld Y，et al.DNA levels in circulating immune complexes decrease at severe SLE disease activity correlation with complement component C1q[J] ......
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