1.5 动物行为观察和神经功能障碍评分 将免疫抗原注射日定为第0天，每日称体重观察病情并进行神经功能障碍评分。从出现临床症状开始至实验终止每天按照Benson评分标准进行评分(如下)，2次/d。1级：尾部无力或跋踞步态伴尾部有力；2级：蹒跚步态伴尾部无力(共济失调)；2.5级：共济失调伴部分单肢麻痹；3级：单肢完全麻痹；3.5级：单肢完全麻痹伴另一肢体部分麻痹；4级：双肢完全麻痹；4.5级；四肢麻痹；5级：死亡。

    1.6 动物处死时间和标本处理 于大鼠免疫后第13天(相当于EAE组发病高峰期)终止实验，处死所有大鼠，无菌条件下迅速取出完整脑，留左脑后放入RNase-free的冻存管于液氮环境下保存，以作为提取RNA用。右脑标本放入4%多聚甲醛固定，进行HE染色和LFB染色。

    1.7 RT-PCR法检测Tim-3 mRNA、Tim-1 mRNA表达 取保存液氮中的脑组织采取Trizol法提取各样本总RNA，紫外分光光度计测定浓度并定量后逆转录，逆转录产物进行PCR反应。根据GenBank中目的基因所对应的cDNA表达序列和提供的相关资料，利用软件Primer Premier 5.0设计上下游引物：TIM-3：上游引物：5′-CAATTCCCTGGCCCAATGAATGA-3′ ......