原发性ITP患儿外周血血小板相关抗体和淋巴细胞亚群的变化及临床意义(1)
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【摘要】 目的：观察原发性ITP患儿外周血血小板抗体及淋巴细胞亚群变化，探讨其与ITP的关系及临床意义。方法：采用流式细胞技术检测患儿与正常儿童外周血血小板相关抗体(PAIgA、G、M)水平及淋巴细胞亚群(CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD4+/CD8+、CD19+、CD3-CD(16+56)+)水平。结果：新诊断ITP组与持续性ITP组PAIg(G、M)水平明显高于正常儿童(P<0.001)；新诊断性ITP组与持续性ITP组和对照组比较，CD3+T细胞、CD4+/CD8+T细胞比值、CD3-CD(16+56)+NK细胞降低，CD3+CD8+T细胞、CD19+B细胞升高，差异均有统计学意义(P<0.05)。结论：原发性ITP患儿存在细胞免疫和体液免疫紊乱，血小板相关抗体和淋巴细胞亚群水平检测的联合使用对原发性ITP的诊断、疗效评估有较好的实用价值。
【关键词】 原发性ITP； 血小板相关抗体； 流式细胞术； 淋巴细胞亚群
原发性免疫性血小板减少症，过去也称为特发性血小板减少性紫癜是一种获得性自身免疫性疾病，以没有明显原因的单纯性血小板减少(血小板计数<100×109/L)为特征[1]。目前研究普遍认为，原发性ITP发病机制不仅与抗血小板抗体所介导的血小板破坏有关，同时血小板生成减少、T细胞的介导影响也发挥了重要作用[2]，但确切机制仍未完全明确。本文就血小板相关抗体、淋巴细胞亚群与原发性ITP发生的关系及其临床意义进行探讨。
1 资料与方法
1.1 一般资料 89例原发性ITP患儿均为2011年9月-2012年8月本院收治的住院患儿，诊断符合文献诊断标准[3]。其中男54例，女35例，年龄2个月～14岁，平均(4.69±2.79)岁，均为初次发病。新诊断组(诊断后3个月以内血小板减少)66例，持续性组(诊断后3～12个月血小板持续减少)23例。选择25例体检健康儿童作对照组，男15例，女10例，年龄9个月～12岁，平均(5.07±2.12)岁。两组性别、年龄比较，差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。
1.2 主要试剂与仪器 单克隆抗体CD41-PE、FITC标记的羊F(ab’)2抗IgG(阴性对照)、羊F(ab’)2抗人IgG(γ)FITC、羊F(ab’)2抗人IgM(μ)FITC、羊F(ab’)2抗人IgA(α)FITC单克隆抗体均为Coulter公司产品。CD4-FITC/CD8-PE/CD3-PC5、CD3-FITC/CD(16+56)-PE、CD19-PC5及溶血素均为Coulter公司产品。FC500型流式细胞仪为美国Coulter公司。
1.3 方法
1.3.1 流式细胞术检测血小板相关抗体 将EDTA抗凝全血经低速离心富集、洗涤血小板后，以CD41-PE进行荧光标记处理，然后分别以FITC标记的羊F(ab’)2抗IgG(阴性对照)、羊F(ab’)2抗人IgG(γ)FITC、羊F(ab’)2抗人IgM(μ)FIT、羊F(ab’)2抗人IgA(α)FITC标记血小板，洗涤后上机测定。
1.3.2 流式细胞术检测淋巴细胞亚群 采集空腹静脉血2ml(EDTA抗凝)取2支流式细胞仪专用试管分别标记1、2，管1加5μl CD4-FITC/CD8-PE/CD3-PC5，管2分别加5μl CD3-FITC/CD(16+56)-PE、CD19-PC5，在每支试管中再加入20 μl抗凝全血，充分混匀，室温避光孵育30 min后，加入溶血素100 μl使红细胞溶解，1200 r/min离心5 min，弃上清液，PBS洗涤1次，最后以500 μl PBS缓冲液悬浮，上机测定。
1.4 统计学处理 使用SPSS 17.0统计软件进行分析，计量资料以(x±s)表示，首先对检测数据采用非参数Kruskal-Wallis检验，组间比较采用秩变换分析，P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 原发性ITP患者外周血PAIg检测结果 新诊断组与持续性组PAIg(G、M)水平显著高于对照组，比较差异有统计学意义(P<0.001)；新诊断组与持续性组间血小板抗体水平比较，差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。
2.2 原发性ITP患者外周血淋巴细胞亚群检测结果 新诊断性ITP组与持续性ITP组和对照组比较，CD3+T细胞、CD4+/CD8+T细胞比值、CD3-CD(16+56)+NK细胞降低，CD3+CD8+T细胞、CD19+B细胞升高，比较差异均有统计学意义(P<0.05)；新诊断性ITP组与持续性ITP组比较，组间CD3+T细胞、CD3+CD4+T细胞、CD4+/CD8+T细胞比值、CD19+T细胞、CD3+CD8+T细胞差异均有统计学意义(P<0.05)，两组CD3-CD(16+56)+NK细胞比较差异无统计学意义(P>0.05)。见表2。
3 讨论
原发性ITP是儿童期好发的一种自身免疫性出血性疾病，以自身抗体产生导致血小板破坏增多而致外周血血小板减少。关于ITP的发病机制复杂多样，其中单核-巨噬细胞系统中自身抗体介导的血小板破坏增加、骨髓巨核细胞损伤或功能异常使血小板生成减少，被认为是经典的ITP发病机制[4]。这些抗体主要表现为IgG增高 ......
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