玉竹对小鼠免疫抑制调节作用的研究
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参见附件。
【摘要】 目的：研究玉竹对免疫功能的影响。方法：将昆明种小鼠分为空白对照组、模型组、玉竹水煎液组及香菇菌多糖阳性对照组，腹腔注射给药环磷酰胺3 d造成小鼠免疫抑制模型，同时分别灌胃给药生理盐水及相应药物7 d后测定玉竹对小鼠胸腺、脾脏质量、吞噬百分率、吞噬指数、溶血素、溶血斑以及淋巴细胞转化率的影响。结果：玉竹能提高环磷酰胺造成免疫抑制模型小鼠胸腺、脾脏质量、吞噬百分率、吞噬指数，促进溶血素、溶血斑形成，提高淋巴细胞转化率；与模型组相比可提高免疫抑制小鼠各免疫指数，比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论：玉竹具有增强免疫作用的功能。
【关键词】 玉竹； 免疫； 药理
玉竹为百合科多年生草本植物玉竹Polugonatum odoratum(Mill.) Druce 的根茎，其性甘，味微寒。具有养阴润燥，生津止渴的功效。可用于阴虚肺燥的干咳少痰，热病伤津，烦热口渴及消渴，同时也可以用于阴虚外感，养阴而不恋邪[1]。《本草正义》曰：“玉竹，味甘多脂，柔润之品……今惟治肺胃燥热，津液枯凅，口渴嗌干等症，而胃火炽盛，燥渴消谷，多食易饥者，尤有甚效。”玉竹中含有玉竹多糖、氨基酸、微量元素、甾体皂苷、甾醇、维生素、鞣质、粘质等成分[2]。近年来研究发现，玉竹具有降血脂、降血糖、强心、升压、改善心肌缺血、抗肿瘤等作用[3]。其中这些研究多是玉竹某个单一成分的药理作用，而对于玉竹饮片药理作用的研究目前少有报道。整体观念为中医理论的指导原则之一，因而中药饮片的药理作用在实际生产和研究中也显得十分重要。本文通过用环磷酰胺造成小鼠免疫抑制模型并测定各免疫指数，探讨玉竹饮片在免疫功能的作用及机制。
1 材料与方法
1.1 动物 雌性普通级昆明种小鼠40只，体重(20±2)g，购于郑州大学医学院实验动物中心，合格证号SCXK(豫) 2010-0002。
1.2 仪器 BI-2000医学图像分析系统(成都泰盟科技公司)；TDL-40B型低速台式离心机(上海安亭科学仪器厂)；DY89-1型电动玻璃匀浆机(宁波新芝生物科技股份有限公司)；UV-2201紫外-可见分光光度计(日本岛津)等。
1.3 药品及试剂 玉竹饮片购于郑州同盛药业有限公司，经河南中医学院生药学教研室陈随清教授鉴定为百合科植物玉竹Polygonatum odoratum (Mill.) Druce的干燥根茎经加工的饮片。玉竹水煎液；环磷酰胺(江苏恒瑞医药股份有限公司，批号08110921)；香菇菌多糖片(湖北广仁药业有限公司，批号080702)；植物血凝素(上海伊华医学科技有限公司，批号20085601)；瑞氏染液(四川省迈克科技有限公司，批号0908033)；柠檬酸钠(天津化学试剂三厂，批号20020228)等。
1.4 样品水煎液及香菇菌多糖溶液的制备 取玉竹饮片50 g，加水煎3次(加水量分别为10，8，6倍量)，40 min/次，煎出液合并浓缩至每毫升含1 g饮片；取香菇多糖片0.2752 g，用0.5%羧甲基纤维素钠溶液制成6 g/L的混悬液。储存冰箱中备用。
1.5 方法
1.5.1 巨噬细胞吞噬率、吞噬指数及免疫器官指数的测定 将40只小鼠随机分为四组，每组10只，分别为空白对照组，模型组，玉竹水煎液组，香菇菌多糖阳性对照组。除空白对照组外，其余各组小鼠ip环磷酰胺(Cyclophosphamide，CTX)0.08 g/kg，1次/d，连续3 d。同时ig给药，空白对照组和模型组给予生理盐水，香菇菌多糖阳性对照组给予香菇菌多糖片混悬液0.12 g/kg，玉竹组给予玉竹水煎液12.5 g/kg(1 g饮片浓缩成1 ml)，每天给药1次，连续7 d。试验方法参考文献[4]，取结果，在显微镜下观察并计算吞噬率及吞噬指数，取小鼠免疫器官称重并计算免疫器官指数[5]。
1.5.2 溶血素及溶血斑形成测定 小鼠分组、造模及给药同1.5.1。实验步骤参考文献[4]，以分光光度比色法测定溶血素和溶血空斑的形成情况。
1.5.3 淋巴细胞转化测定 小鼠分组、造模及给药同1.5.1。实验步骤参考文献[4]，油镜观察外周血淋巴细胞的转化率。
1.6 统计学处理 用SPSS 13.0软件进行单因素方差分析，计量资料采用(x±s)进行表示，行t检验，P<0.05为差异具有统计学意义。
2 结果
2.1 对环磷酰胺免疫抑制小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能及免疫器官质量的影响 模型组吞噬功能指标及免疫器官指数均明显降低，证明造模成功；与模型组比较，玉竹组及阳性组可明显增强免疫抑制小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬百分率、吞噬指数、胸腺指数及脾脏指数(P<0.01)，玉竹组及阳性组在吞噬百分率及吞噬指数上与空白对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)。见表1。
2.2 对环磷酰胺致免疫抑制小鼠溶血素、溶血斑形成及淋巴细胞转化的影响 实验数据表明，模型组与空白对照组的这三个指标比较差异有统计学意义(P<0.01)；玉竹组及香菇菌多糖组与模型组的这些指标比较差异有统计学意义(P<0.01)，说明玉竹及香菇菌多糖均显著改善这3项指标。与正常组比较，玉竹组在溶血素形成上比较差异有统计学意义(P<0.01)，在溶血斑形成及淋巴细胞转化率上作用不显著或有差异。见表2。
3 讨论
玉竹属于补虚药，研究发现补虚药可以增强机体免疫功能，对于防止机体免疫功能低下及肿瘤、感染性疾病等具有重要的意义[6]。本实验通过对免疫低下小鼠各免疫指标的测定来研究玉竹饮片的药理作用，实验结果显示玉竹饮片对免疫抑制小鼠各指标均起到正相关的作用，且差异显著，说明玉竹饮片能够显著提高小鼠细胞免疫、体液免疫及非特异性免疫功能。本研究表明玉竹能明显对抗环磷酰胺所致的小鼠免疫功能低下，对机体免疫多个环节均有明显促进作用，从理论上证明了玉竹饮片增强免疫作用的药理作用。玉竹组在胸腺、脾脏指数，溶血素、溶血斑形成及淋巴细胞转化率等免疫指数上不及空白对照组或与空白对照组相当，这可能与玉竹组小鼠造模，并且用药时间不够长有关[7-8]。有研究表明，玉竹多糖、玉竹皂苷均具有增强小鼠免疫作用[3]，然而玉竹提高机体免疫是否只有这两成成分，或者是更多中化学成分的加和有待进一步研究。
参考文献
[1] 雷载权.中药学[M].上海：上海科学技术出版社，2002：309.
[2] 晏春耕，曹瑞芳.玉竹的研究进展与开发利用[J].中国现代中药，2007 ......
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