CIP2A在慢性粒细胞白血病中的表达及意义(1)
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【摘要】 目的：探讨蛋白磷酸酶2A癌性抑制因子在慢性粒细胞白血病各期中的表达及意义。方法：采用免疫化学SP法测定CIP2A在对照组及CML各期中的表达。结果：CIP2A在CML-AP/BP组的表达显著高于对照组和CML-CP组(P<0.05)，CML-CP组和对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)；CIP2A在CML-AP/BP未缓解组明显高于缓解组(P<0.05)。结论：CIP2A在CML-AP/BP骨髓单个核细胞中高表达且与CML发生急变及预后相关。
【关键词】 蛋白磷酸酶2A癌性抑制因子； 慢性粒细胞白血病； 免疫组化
BCR/ABL融合基因的形成是慢性粒细胞白血病(CML)发生的重要机制， 针对BCR/ABL融合基因靶向治疗药物酪氨酸激酶的应用使得CML疗效明显改善。但是一旦急变，患者往往数月之内死亡。关于CML急变的机制仍不明确。因此，寻找新的CML急变的相关基因对于揭示CML发生急变的分子机制和发现治疗的新靶点具有重要的意义。蛋白磷酸酶2A癌性抑制因子(cancerous inhibitor of protein phosphatase 2A，CIP2A)是最近被识别的一种癌蛋白[1]，其在白血病中的表达情况及其意义报道很少。本研究采用免疫组化方法，检测CIP2A在CML各期中的表达，初步探讨CIP2A在CML中的表达及意义。
1 资料与方法
1.1 一般资料 选择笔者所在医院2009年7月-2011年6月门诊及住院CML患者43例，男24例，女19例，年龄15～75岁，平均54.7岁，慢性期27例(CML-CP组)，加速期3例和急变期13例(CML-AP/BP组)，加速期和急变期16例化疗后完全缓解11例(缓解组)，未缓解5例(未缓解组)。对照组为非恶性液病患者19例，男12例，女7例，年龄19～71岁，平均50.2岁。CML诊断及疗效参照张之南主编《血液病诊断及疗效标准》[2]。
1.2 检测方法 用免疫组织化学法检测骨髓单个核细胞CIP2A，CIP2A多克隆抗体(Santa Crus公司产品)，生物素标记的羊抗小鼠二抗及SP免疫标记试剂盒(北京中杉金桥生物技术有限公司产品)。髂后或髂前上嵴穿刺取骨髓，用淋巴细胞分离液(比重1.077)分离骨髓单个核细胞并涂片，干燥后用新鲜配制的丙酮溶液于室温下固定30 min，用磷酸盐缓冲液(0.01 mol/L，pH 7.4)漂洗3次；0.1% Triton 100通透10 min，再用PBS漂洗3次，然后根据试剂说明书进行操作。每一批实验均设阳性及空白对照，阳性对照采用胃癌切片(由试剂公司提供)，空白对照以PBS代替一抗进行检测。
1.3 结果判定 细胞胞浆着棕黄色颗粒状弥漫或局灶分布者为阳性细胞。根据阳性所占的比例及显色程度，参照1997年全国免疫组化技术诊断标准化专题研讨会意见，对阳性细胞进行积分：细胞质和(或)核内见浅黄色颗粒，明显高于背景底色，阳性颗粒所占细胞面积的比例<50%为1分；细胞质和(或)核内见较深黄色颗粒，阳性颗粒所占细胞面积的比例为51%～70%为2分；细胞质和(或)核内见大量深黄色颗粒，浆和(或)核有时可被颗粒掩盖而不显，阳性颗粒所占细胞面积的比例>70%为3分。每片统计500个细胞中的阳性细胞数，计算表达率及阳性积分。每片统计500个细胞中的阳性细胞数及阳性细胞积分，并换算为每100个细胞的平均阳性率和平均积分。
1.4 统计学处理 应用SPSS 13.0统计软件进行统计学处理，计量资料采用(x±s)进行表示，多组间检验采用方差分析，组间两两比较采用q检验；两组间均数比较采用独立样本t检验，P<0.05为差异具有统计学意义。
2 结果
2.1 CIP2A在CML患者各期骨髓单个核细胞的表达 CIP2A阳性产物呈棕黄色颗粒状定位于细胞浆内，CML-AP/BP组CIP2A蛋白表达阳性率及阳性积分均显著高于对照组和CML-CP组(P<0.05)，CML-CP组和对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。
2.2 CIP2A在CML-AP/BP患者化疗一疗程后缓解组及未缓解组骨髓单个核细胞表达的比较 CIP2A阳性产物呈棕黄色细颗粒状弥散于细胞质内，未缓解组CIP2A的表达显著高于缓解组(P<0.05)。见表2。
3 讨论
CIP2A是近年来识别的能够抑制蛋白磷酸酶2A(PP2A)活性的蛋白[1]，目前发现在人头颈部鳞状上皮细胞癌(HNSCC)、结肠癌、胃癌、乳腺癌和肝癌组织中高表达，但在正常组织低表达[1-5]。提示CIP2A可能是一种普遍存在的致癌因子。研究表明：CIP2A能够抑制PP2A对癌蛋白c-myc第62位丝氨酸(S62)的脱磷酸化作用，抑制c-myc蛋白水解而升高，促进细胞的恶性转化及肿瘤的进展[6-7]。王涓冬等[8]在急性髓系白血病(AML)患者骨髓单个核细胞中检测到CIP2A高表达，而健康志愿者和化疗后完全缓解AML患者不表达或弱表达CIP2A，在人类白血病细胞系HL60、THP-l、Jurkat T和K562中CIP2A也呈现高表达，提示CIP2A是一种急性白血病相关的癌基因，参与了AML的发病过程。本研究通过免疫组织化学法检测CML患者骨髓单个核细胞中CIP2A的表达 ......
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