碱性裂解液提取DNA法在环氧化酶亚型基因敲除小鼠基因型鉴定中的应用(1)
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【摘要】 目的：应用碱性裂解液法提取的DNA鉴定环氧化酶(COX)亚型基因敲除小鼠，为鉴定纯合子小鼠提供一种方便快捷、低成本、可靠的实验方法。方法：取子代小鼠耳缘组织于EP管中，用碱性裂解液提取基因组DNA，PCR扩增COX-1和COX-2基因片段，通过琼脂糖凝胶电泳对小鼠基因型作出鉴定。结果：碱性裂解液法提取的DNA能应用于子代小鼠的不同基因型的鉴定，即野生型(COX-1+/+；COX-2+/+)、杂合子(COX-1+/-；COX-2+/-)和纯合子(COX-1-/-；COX-2-/-)。结论：建立了碱性裂解液提取DNA法，并将该法成功应用于环氧化酶亚型基因敲除小鼠基因型鉴定中。
【关键词】 碱性裂解液； 环氧化酶； 基因敲除小鼠
环氧化酶(COX)催化花生四烯酸(arachidonic acid，AA)产生前列腺素类物质，其中在心血管系统主要是前列环素(PGI2)和血栓烷A2(TxA2)，COX作为AA代谢中主要的关键限速酶之一，在心血管方面发挥重要的病理生理作用[1]。COX主要包括COX-1和COX-2两种亚型，由于现阶段COX亚型选择性抑制剂存在着非特异性作用，因此基因敲除小鼠对进一步明确COX亚型的生理及病理生理功能具有重要作用，进而建立COX亚型基因敲除小鼠的鉴定方法也就尤为重要[2]。目前，国内基因敲除小鼠鉴定中DNA的提取主要有两种方法，第一种即采用蛋白酶K消化后用经典酚氯仿提取法：通过有机溶剂抽提，去除蛋白、多糖、酚类等杂质 ......
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