徐春华 刘越 肖利民 邓圣泽 李东海

    随着分子生物学及相关学科的发展，肿瘤的基因疗法倍受关注，其中自杀基因疗法显示了较好的应用前景，HSV-TK/GCV系统是目前研究较为广泛的自杀基因治疗系统，研究表明，单一基因治疗效果不佳，而自杀基因与免疫治疗相结合是研究发展的趋势，可增强旁杀伤作用和激发肿瘤局部的免疫反应[1-2]。所以为了研究腺病毒载体介导的单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-TK)与细胞因子白细胞介素-18(IL-18)基因联合应用对C6鼠脑胶质瘤细胞的治疗效果，本实验拟通过构建含TK及IL-18基因的重组腺病毒载体，为肿瘤的基因治疗提供实验依据。

    1 资料与方法

    1.1 一般资料 (1)细胞株与质粒：PVA腺病毒载体 pAdtrackCMV、pAdEasy-1、大肠杆菌 E.coli，293细胞。(2)试剂：限制性内切酶XbaI、Kpn、Pme I、EcoR I、ExTaqDNA聚合酶、T4DNA连接酶、DNA凝胶回收试剂盒、碱性磷酸酶CIAP、DNA提取试剂盒等均购自TaKaRa公司；胰蛋白酶，小牛血清，DMEM，Polybrene，DMSO为Sigma公司产品；脂质体LipofectamineTM2000、DNA Ladder：Invitrogen公 司 胶回收小量试剂盒购自上海华舜生物工程有限公司；中量质粒提取试剂盒购自Omega公司。

    1.2 方法 通过在NCBI上的检索，在Gene Bank数据库中获取基因IL-18、TK的全长序列，引物由ABI公司的Primer Express Software v 2.0设计，由invitrogen公司合成。扩增IL-18及TK基因，IL-18引物序列：上游：5’-cacGGTACCATGGCTGCTGAACCAGTAGAAG T-3’下游：5’-gcTCTAGACTAGTCTTCGTTTTGAACAG TGAA-3’，预计长度：582 bp；TK 引物序列：上游：5’-cacGGTACCATGAGCTGCATTAACCTGCCCAC-3’ ......