1.4.2 传统细菌培养法 (1)水样处理：将水样预处理后通过孔径0.45 μm滤膜过滤，取下滤膜置于灭菌水中，充分洗脱，备用。(2)热处理：取1 mL洗脱样品置50 ℃水浴加热30 min。(3)酸处理：取2 mL洗脱样品调pH至2.2摇匀放置5 min。(4)分离培养：将不处理和经处理的样品各0.1 mL分别接种GVPC琼脂平板，置于35～37 ℃、2.5% CO2培养1～10 d，每天观察菌落生长情况。(5)军团菌的鉴定：凡是在GVPC琼脂平板上48 h后生长，菌落呈灰白色、圆形稍凸、边缘整齐、表面光滑湿润、毛玻璃状，挑起似牙膏状，可初步确定为可疑菌落[4]。挑取可疑菌落接种BCYE和BCYE-CyS琼脂平板，35～37 ℃培养2 d，凡在BCYE琼脂平板生长而在BCYE-Cys琼脂平板不生长的菌落可初步认定为军团菌，再通过革兰氏染色涂片镜检、生化试验、血清凝集试验鉴定军团菌。

    1.4.3 实时荧光PCR测定 (1)样品处理：取待测样品1 mL加到1.5 mL无菌离心管中，8000 rpm离心5 min，弃上清，加入50 ?L提取液，混匀后水浴5 min，13 000 rpm离心5 min，吸取上清液进行PCR检测 ......