慢性乙型病毒性肝炎湿热量化的临床探讨(2)
【Key words】 Chronic hepatitis B; Dampness-heat syndrome; Quantization
First-author’s address:The People’s Hospital of Gaoyao City,Gaoyao 526020,China
doi:10.3969/j.issn.1674-4985.2015.30.037
乙型病毒性肝炎是人类的重要疾病类型之一,是严重影响全球公共卫生的重大问题。全球20亿人群曾感染乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV),其中3.5亿人为慢性乙型病毒性肝炎,且终身携带乙型肝炎病毒,最终并发肝硬化或肝脏恶性肿瘤而死亡人数高达100万人/年[1-2]。近年来,有关于慢性乙型病毒性肝炎的中医辨证分型与T细胞亚群、白细胞介素、载脂蛋白等量化指标关系的研究报道[3]。同时有慢性乙型肝炎临床症状与热休克蛋白70的文献研究报道[4]。但关于尿液水通道蛋白2 (AQP-2)、血清休克蛋白70(HSP70)和外周血T淋巴细胞亚群与慢性乙型病毒性肝炎湿热证的关系研究甚少。本研究通过检测尿液水通道蛋白2、血清热休克蛋白70和外周血T淋巴细胞亚群等指标的变化,以探讨慢性乙型病毒性肝炎湿热证的量化规律,现报道如下。
, http://www.100md.com
1 资料与方法
1.1 一般资料 选取2012年1月-2013年12月高要市人民医院消化内科住院部西医诊断慢性乙型病毒性肝炎,中医辨证属于湿热证患者101例,排除甲型病毒性肝炎、丙型病毒性肝炎、丁型病毒性肝炎、戊型病毒性肝炎、酒精性肝病、药物性肝病、自身免疫性肝病、肝硬化、肝纤维化和肝脏恶性肿瘤等肝脏疾病,将患者分为两组,其中慢性乙型病毒性肝炎湿偏重证者为A组,共50例,其中男32例,女18例,年龄19~65岁,平均(45.23±6.32)岁,慢性乙型病毒性肝炎热偏重证者为B组,共51例,其中男34例,女17例,年龄19~64岁,平均(45.15±6.24)岁。同期选取肝功能正常,未合并肝脏疾病和湿热证的健康人群作为正常组,共50例,其中男30例,女20例,年龄18~66岁,平均(45.44±6.01)岁,三组间性别、年龄等一般资料比较差异均无统计学意义(P>0.05),具有可比性。
1.2 慢性乙型病毒性肝炎西医诊断标准 参考2000年中华医学会传染病与寄生虫病学分会、肝病学分会联合修订的《病毒性肝炎防治方案》标准[5],血清乙型肝炎表面抗原(hepatitis B surface antigen,HBsAg)或血清HBV-DNA阳性大于6个月以上,血清丙氨酸转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)大于正常上限2倍而低于正常上限的10倍。
, 百拇医药
1.3 湿热证中医诊断标准 湿热证的辨证参照《中医内科学》(第6版,王永炎主编)黄疸章节中的辨证分型拟定[6]。(1)证候表现为身目发黄如橘,无发热或身热不扬,头重身困,嗜卧乏力,胸脘痞闷,厌食油腻,纳呆呕恶,口粘不渴,小便不利,便稀不爽,舌苔厚腻微黄,脉濡缓或弦滑者辨为湿偏重证。(2)证候表现为全身皮肤及白睛发黄,黄疸重,色泽鲜明,壮热口渴,心中懊恼,胁胀痛而拒按,恶心呕吐,纳呆,小便赤黄或短少,大便秘结,舌红苔黄腻或黄糙,脉弦数或滑数者辨为热偏重证。
1.4 检测方法 (1)尿液水通道蛋白2(AQP-2):留取晨尿20 mL,尿液样本收集后离心,取上清液,放入-20 ℃冰箱冻存待测。采用酶联免疫吸附测定法(Enzyme-Linked Immuno Sorbent Assay,ELISA 法)检测尿液水通道蛋白2(AQP-2)水平,各试剂及尿液标本在检测前平衡至室温,采用0.05% SDS-PBS等倍稀释后,4 ℃过夜,漂洗封闭后滴加一抗(兔抗鼠1∶1000,经3%BSA-PBS稀释),37 ℃环境下孵育2 h,漂洗后滴加二抗(1∶2000),37 ℃环境下孵育1.5 h,显色终止反应,采用酶标仪于450 nm处测定吸光度(OD值)。(2)采用ELISA 法检测血清热休克蛋白70(HSP70),空腹抽取静脉血2~3 mL,血标本抽取后随即分离出血清放入-20 ℃冰箱冻存待测。用ELISA方法测定血清样品中HSP70含量,各试剂及血液标本在检测前平衡至室温,采用PBS缓冲液洗涤,4 ℃过夜,漂洗封闭后滴加一抗,常温下孵育2 h,PBS缓冲液洗涤后滴加二抗,常温下孵育1.5 h,显色终止反应,采用酶标仪450 nm处测定吸光度。(3)外周血T淋巴细胞亚群:采用抗体致敏的红细胞花环试验间接测定外周血T淋巴细胞亚群,试剂由武汉生物制品研究所提供,采用COULTER流式细胞仪测定,以%表示。
, 百拇医药
1.5 统计学处理 本研究数据采用SPSS 18.0统计软件进行分析,实验结果的数据类型均为计量资料,属完全随机设计的多组均数比较,以 (x±s)表示,采用One-Way ANOVA对各组实验结果进行方差分析,分析前首先考察方差齐性,方差齐则组间多重比较用LSD法检验,方差不齐则组间多重比较用Dunnett T3法检验,以P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 组间AQP-2和HSP70的比较 A组AQP-2明显高于对照组,两组比较差异具有统计学意义(q=15.93,P<0.05),B组AQP-2明显高于对照组,两组比较差异具有统计学意义(q=14.51,P<0.05),且A组AQP-2明显高于B组,两组比较差异具有统计学意义(q=9.57,P<0.05)。A组HSP70明显高于对照组,两组比较差异具有统计学意义(q=7.21,P<0.05),B组HSP70明显高于对照组,两组比较差异具有统计学意义(q=14.89,P<0.05),且B组HSP70明显高于A组,两组比较差异具有统计学意义(q=4.41,P<0.05),见表1。, 百拇医药(陈佩婵 侯延平 郑振 刘先秒 谭庆林)
First-author’s address:The People’s Hospital of Gaoyao City,Gaoyao 526020,China
doi:10.3969/j.issn.1674-4985.2015.30.037
乙型病毒性肝炎是人类的重要疾病类型之一,是严重影响全球公共卫生的重大问题。全球20亿人群曾感染乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV),其中3.5亿人为慢性乙型病毒性肝炎,且终身携带乙型肝炎病毒,最终并发肝硬化或肝脏恶性肿瘤而死亡人数高达100万人/年[1-2]。近年来,有关于慢性乙型病毒性肝炎的中医辨证分型与T细胞亚群、白细胞介素、载脂蛋白等量化指标关系的研究报道[3]。同时有慢性乙型肝炎临床症状与热休克蛋白70的文献研究报道[4]。但关于尿液水通道蛋白2 (AQP-2)、血清休克蛋白70(HSP70)和外周血T淋巴细胞亚群与慢性乙型病毒性肝炎湿热证的关系研究甚少。本研究通过检测尿液水通道蛋白2、血清热休克蛋白70和外周血T淋巴细胞亚群等指标的变化,以探讨慢性乙型病毒性肝炎湿热证的量化规律,现报道如下。
, http://www.100md.com
1 资料与方法
1.1 一般资料 选取2012年1月-2013年12月高要市人民医院消化内科住院部西医诊断慢性乙型病毒性肝炎,中医辨证属于湿热证患者101例,排除甲型病毒性肝炎、丙型病毒性肝炎、丁型病毒性肝炎、戊型病毒性肝炎、酒精性肝病、药物性肝病、自身免疫性肝病、肝硬化、肝纤维化和肝脏恶性肿瘤等肝脏疾病,将患者分为两组,其中慢性乙型病毒性肝炎湿偏重证者为A组,共50例,其中男32例,女18例,年龄19~65岁,平均(45.23±6.32)岁,慢性乙型病毒性肝炎热偏重证者为B组,共51例,其中男34例,女17例,年龄19~64岁,平均(45.15±6.24)岁。同期选取肝功能正常,未合并肝脏疾病和湿热证的健康人群作为正常组,共50例,其中男30例,女20例,年龄18~66岁,平均(45.44±6.01)岁,三组间性别、年龄等一般资料比较差异均无统计学意义(P>0.05),具有可比性。
1.2 慢性乙型病毒性肝炎西医诊断标准 参考2000年中华医学会传染病与寄生虫病学分会、肝病学分会联合修订的《病毒性肝炎防治方案》标准[5],血清乙型肝炎表面抗原(hepatitis B surface antigen,HBsAg)或血清HBV-DNA阳性大于6个月以上,血清丙氨酸转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)大于正常上限2倍而低于正常上限的10倍。
, 百拇医药
1.3 湿热证中医诊断标准 湿热证的辨证参照《中医内科学》(第6版,王永炎主编)黄疸章节中的辨证分型拟定[6]。(1)证候表现为身目发黄如橘,无发热或身热不扬,头重身困,嗜卧乏力,胸脘痞闷,厌食油腻,纳呆呕恶,口粘不渴,小便不利,便稀不爽,舌苔厚腻微黄,脉濡缓或弦滑者辨为湿偏重证。(2)证候表现为全身皮肤及白睛发黄,黄疸重,色泽鲜明,壮热口渴,心中懊恼,胁胀痛而拒按,恶心呕吐,纳呆,小便赤黄或短少,大便秘结,舌红苔黄腻或黄糙,脉弦数或滑数者辨为热偏重证。
1.4 检测方法 (1)尿液水通道蛋白2(AQP-2):留取晨尿20 mL,尿液样本收集后离心,取上清液,放入-20 ℃冰箱冻存待测。采用酶联免疫吸附测定法(Enzyme-Linked Immuno Sorbent Assay,ELISA 法)检测尿液水通道蛋白2(AQP-2)水平,各试剂及尿液标本在检测前平衡至室温,采用0.05% SDS-PBS等倍稀释后,4 ℃过夜,漂洗封闭后滴加一抗(兔抗鼠1∶1000,经3%BSA-PBS稀释),37 ℃环境下孵育2 h,漂洗后滴加二抗(1∶2000),37 ℃环境下孵育1.5 h,显色终止反应,采用酶标仪于450 nm处测定吸光度(OD值)。(2)采用ELISA 法检测血清热休克蛋白70(HSP70),空腹抽取静脉血2~3 mL,血标本抽取后随即分离出血清放入-20 ℃冰箱冻存待测。用ELISA方法测定血清样品中HSP70含量,各试剂及血液标本在检测前平衡至室温,采用PBS缓冲液洗涤,4 ℃过夜,漂洗封闭后滴加一抗,常温下孵育2 h,PBS缓冲液洗涤后滴加二抗,常温下孵育1.5 h,显色终止反应,采用酶标仪450 nm处测定吸光度。(3)外周血T淋巴细胞亚群:采用抗体致敏的红细胞花环试验间接测定外周血T淋巴细胞亚群,试剂由武汉生物制品研究所提供,采用COULTER流式细胞仪测定,以%表示。
, 百拇医药
1.5 统计学处理 本研究数据采用SPSS 18.0统计软件进行分析,实验结果的数据类型均为计量资料,属完全随机设计的多组均数比较,以 (x±s)表示,采用One-Way ANOVA对各组实验结果进行方差分析,分析前首先考察方差齐性,方差齐则组间多重比较用LSD法检验,方差不齐则组间多重比较用Dunnett T3法检验,以P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 组间AQP-2和HSP70的比较 A组AQP-2明显高于对照组,两组比较差异具有统计学意义(q=15.93,P<0.05),B组AQP-2明显高于对照组,两组比较差异具有统计学意义(q=14.51,P<0.05),且A组AQP-2明显高于B组,两组比较差异具有统计学意义(q=9.57,P<0.05)。A组HSP70明显高于对照组,两组比较差异具有统计学意义(q=7.21,P<0.05),B组HSP70明显高于对照组,两组比较差异具有统计学意义(q=14.89,P<0.05),且B组HSP70明显高于A组,两组比较差异具有统计学意义(q=4.41,P<0.05),见表1。, 百拇医药(陈佩婵 侯延平 郑振 刘先秒 谭庆林)