慢性乙型病毒性肝炎湿热量化的临床探讨(2)
【Key words】 Chronic hepatitis B； Dampness-heat syndrome； Quantization
First-author’s address：The People’s Hospital of Gaoyao City，Gaoyao 526020，China
doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2015.30.037
乙型病毒性肝炎是人类的重要疾病类型之一，是严重影响全球公共卫生的重大问题。全球20亿人群曾感染乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)，其中3.5亿人为慢性乙型病毒性肝炎，且终身携带乙型肝炎病毒，最终并发肝硬化或肝脏恶性肿瘤而死亡人数高达100万人/年[1-2]。近年来，有关于慢性乙型病毒性肝炎的中医辨证分型与T细胞亚群、白细胞介素、载脂蛋白等量化指标关系的研究报道[3]。同时有慢性乙型肝炎临床症状与热休克蛋白70的文献研究报道[4]。但关于尿液水通道蛋白2 (AQP-2)、血清休克蛋白70(HSP70)和外周血T淋巴细胞亚群与慢性乙型病毒性肝炎湿热证的关系研究甚少。本研究通过检测尿液水通道蛋白2、血清热休克蛋白70和外周血T淋巴细胞亚群等指标的变化，以探讨慢性乙型病毒性肝炎湿热证的量化规律，现报道如下。
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1 资料与方法
1.1 一般资料 选取2012年1月-2013年12月高要市人民医院消化内科住院部西医诊断慢性乙型病毒性肝炎，中医辨证属于湿热证患者101例，排除甲型病毒性肝炎、丙型病毒性肝炎、丁型病毒性肝炎、戊型病毒性肝炎、酒精性肝病、药物性肝病、自身免疫性肝病、肝硬化、肝纤维化和肝脏恶性肿瘤等肝脏疾病，将患者分为两组，其中慢性乙型病毒性肝炎湿偏重证者为A组，共50例，其中男32例，女18例，年龄19～65岁，平均(45.23±6.32)岁，慢性乙型病毒性肝炎热偏重证者为B组，共51例，其中男34例，女17例，年龄19～64岁，平均(45.15±6.24)岁。同期选取肝功能正常，未合并肝脏疾病和湿热证的健康人群作为正常组，共50例，其中男30例，女20例，年龄18～66岁，平均(45.44±6.01)岁，三组间性别、年龄等一般资料比较差异均无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。
1.2 慢性乙型病毒性肝炎西医诊断标准 参考2000年中华医学会传染病与寄生虫病学分会、肝病学分会联合修订的《病毒性肝炎防治方案》标准[5]，血清乙型肝炎表面抗原(hepatitis B surface antigen，HBsAg)或血清HBV-DNA阳性大于6个月以上，血清丙氨酸转氨酶(alanine aminotransferase，ALT)大于正常上限2倍而低于正常上限的10倍。
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1.3 湿热证中医诊断标准 湿热证的辨证参照《中医内科学》(第6版，王永炎主编)黄疸章节中的辨证分型拟定[6]。(1)证候表现为身目发黄如橘，无发热或身热不扬，头重身困，嗜卧乏力，胸脘痞闷，厌食油腻，纳呆呕恶，口粘不渴，小便不利，便稀不爽，舌苔厚腻微黄，脉濡缓或弦滑者辨为湿偏重证。(2)证候表现为全身皮肤及白睛发黄，黄疸重，色泽鲜明，壮热口渴，心中懊恼，胁胀痛而拒按，恶心呕吐，纳呆，小便赤黄或短少，大便秘结，舌红苔黄腻或黄糙，脉弦数或滑数者辨为热偏重证。
1.4 检测方法 (1)尿液水通道蛋白2(AQP-2)：留取晨尿20 mL，尿液样本收集后离心，取上清液，放入-20 ℃冰箱冻存待测。采用酶联免疫吸附测定法(Enzyme-Linked Immuno Sorbent Assay，ELISA 法)检测尿液水通道蛋白2(AQP-2)水平，各试剂及尿液标本在检测前平衡至室温，采用0.05% SDS-PBS等倍稀释后，4 ℃过夜，漂洗封闭后滴加一抗(兔抗鼠1∶1000，经3%BSA-PBS稀释)，37 ℃环境下孵育2 h，漂洗后滴加二抗(1∶2000)，37 ℃环境下孵育1.5 h，显色终止反应，采用酶标仪于450 nm处测定吸光度(OD值)。(2)采用ELISA 法检测血清热休克蛋白70(HSP70)，空腹抽取静脉血2～3 mL，血标本抽取后随即分离出血清放入-20 ℃冰箱冻存待测。用ELISA方法测定血清样品中HSP70含量，各试剂及血液标本在检测前平衡至室温，采用PBS缓冲液洗涤，4 ℃过夜，漂洗封闭后滴加一抗，常温下孵育2 h，PBS缓冲液洗涤后滴加二抗，常温下孵育1.5 h，显色终止反应，采用酶标仪450 nm处测定吸光度。(3)外周血T淋巴细胞亚群：采用抗体致敏的红细胞花环试验间接测定外周血T淋巴细胞亚群，试剂由武汉生物制品研究所提供，采用COULTER流式细胞仪测定，以%表示。
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1.5 统计学处理 本研究数据采用SPSS 18.0统计软件进行分析，实验结果的数据类型均为计量资料，属完全随机设计的多组均数比较，以 (x±s)表示，采用One-Way ANOVA对各组实验结果进行方差分析，分析前首先考察方差齐性，方差齐则组间多重比较用LSD法检验，方差不齐则组间多重比较用Dunnett T3法检验，以P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 组间AQP-2和HSP70的比较 A组AQP-2明显高于对照组，两组比较差异具有统计学意义(q=15.93，P<0.05)，B组AQP-2明显高于对照组，两组比较差异具有统计学意义(q=14.51，P<0.05)，且A组AQP-2明显高于B组，两组比较差异具有统计学意义(q=9.57，P<0.05)。A组HSP70明显高于对照组，两组比较差异具有统计学意义(q=7.21，P<0.05)，B组HSP70明显高于对照组，两组比较差异具有统计学意义(q=14.89，P<0.05)，且B组HSP70明显高于A组，两组比较差异具有统计学意义(q=4.41，P<0.05)，见表1。, 百拇医药(陈佩婵 侯延平 郑振 刘先秒 谭庆林)
First-author’s address：The People’s Hospital of Gaoyao City，Gaoyao 526020，China
doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2015.30.037
乙型病毒性肝炎是人类的重要疾病类型之一，是严重影响全球公共卫生的重大问题。全球20亿人群曾感染乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)，其中3.5亿人为慢性乙型病毒性肝炎，且终身携带乙型肝炎病毒，最终并发肝硬化或肝脏恶性肿瘤而死亡人数高达100万人/年[1-2]。近年来，有关于慢性乙型病毒性肝炎的中医辨证分型与T细胞亚群、白细胞介素、载脂蛋白等量化指标关系的研究报道[3]。同时有慢性乙型肝炎临床症状与热休克蛋白70的文献研究报道[4]。但关于尿液水通道蛋白2 (AQP-2)、血清休克蛋白70(HSP70)和外周血T淋巴细胞亚群与慢性乙型病毒性肝炎湿热证的关系研究甚少。本研究通过检测尿液水通道蛋白2、血清热休克蛋白70和外周血T淋巴细胞亚群等指标的变化，以探讨慢性乙型病毒性肝炎湿热证的量化规律，现报道如下。
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1 资料与方法
1.1 一般资料 选取2012年1月-2013年12月高要市人民医院消化内科住院部西医诊断慢性乙型病毒性肝炎，中医辨证属于湿热证患者101例，排除甲型病毒性肝炎、丙型病毒性肝炎、丁型病毒性肝炎、戊型病毒性肝炎、酒精性肝病、药物性肝病、自身免疫性肝病、肝硬化、肝纤维化和肝脏恶性肿瘤等肝脏疾病，将患者分为两组，其中慢性乙型病毒性肝炎湿偏重证者为A组，共50例，其中男32例，女18例，年龄19～65岁，平均(45.23±6.32)岁，慢性乙型病毒性肝炎热偏重证者为B组，共51例，其中男34例，女17例，年龄19～64岁，平均(45.15±6.24)岁。同期选取肝功能正常，未合并肝脏疾病和湿热证的健康人群作为正常组，共50例，其中男30例，女20例，年龄18～66岁，平均(45.44±6.01)岁，三组间性别、年龄等一般资料比较差异均无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。
1.2 慢性乙型病毒性肝炎西医诊断标准 参考2000年中华医学会传染病与寄生虫病学分会、肝病学分会联合修订的《病毒性肝炎防治方案》标准[5]，血清乙型肝炎表面抗原(hepatitis B surface antigen，HBsAg)或血清HBV-DNA阳性大于6个月以上，血清丙氨酸转氨酶(alanine aminotransferase，ALT)大于正常上限2倍而低于正常上限的10倍。
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1.3 湿热证中医诊断标准 湿热证的辨证参照《中医内科学》(第6版，王永炎主编)黄疸章节中的辨证分型拟定[6]。(1)证候表现为身目发黄如橘，无发热或身热不扬，头重身困，嗜卧乏力，胸脘痞闷，厌食油腻，纳呆呕恶，口粘不渴，小便不利，便稀不爽，舌苔厚腻微黄，脉濡缓或弦滑者辨为湿偏重证。(2)证候表现为全身皮肤及白睛发黄，黄疸重，色泽鲜明，壮热口渴，心中懊恼，胁胀痛而拒按，恶心呕吐，纳呆，小便赤黄或短少，大便秘结，舌红苔黄腻或黄糙，脉弦数或滑数者辨为热偏重证。
1.4 检测方法 (1)尿液水通道蛋白2(AQP-2)：留取晨尿20 mL，尿液样本收集后离心，取上清液，放入-20 ℃冰箱冻存待测。采用酶联免疫吸附测定法(Enzyme-Linked Immuno Sorbent Assay，ELISA 法)检测尿液水通道蛋白2(AQP-2)水平，各试剂及尿液标本在检测前平衡至室温，采用0.05% SDS-PBS等倍稀释后，4 ℃过夜，漂洗封闭后滴加一抗(兔抗鼠1∶1000，经3%BSA-PBS稀释)，37 ℃环境下孵育2 h，漂洗后滴加二抗(1∶2000)，37 ℃环境下孵育1.5 h，显色终止反应，采用酶标仪于450 nm处测定吸光度(OD值)。(2)采用ELISA 法检测血清热休克蛋白70(HSP70)，空腹抽取静脉血2～3 mL，血标本抽取后随即分离出血清放入-20 ℃冰箱冻存待测。用ELISA方法测定血清样品中HSP70含量，各试剂及血液标本在检测前平衡至室温，采用PBS缓冲液洗涤，4 ℃过夜，漂洗封闭后滴加一抗，常温下孵育2 h，PBS缓冲液洗涤后滴加二抗，常温下孵育1.5 h，显色终止反应，采用酶标仪450 nm处测定吸光度。(3)外周血T淋巴细胞亚群：采用抗体致敏的红细胞花环试验间接测定外周血T淋巴细胞亚群，试剂由武汉生物制品研究所提供，采用COULTER流式细胞仪测定，以%表示。
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1.5 统计学处理 本研究数据采用SPSS 18.0统计软件进行分析，实验结果的数据类型均为计量资料，属完全随机设计的多组均数比较，以 (x±s)表示，采用One-Way ANOVA对各组实验结果进行方差分析，分析前首先考察方差齐性，方差齐则组间多重比较用LSD法检验，方差不齐则组间多重比较用Dunnett T3法检验，以P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 组间AQP-2和HSP70的比较 A组AQP-2明显高于对照组，两组比较差异具有统计学意义(q=15.93，P<0.05)，B组AQP-2明显高于对照组，两组比较差异具有统计学意义(q=14.51，P<0.05)，且A组AQP-2明显高于B组，两组比较差异具有统计学意义(q=9.57，P<0.05)。A组HSP70明显高于对照组，两组比较差异具有统计学意义(q=7.21，P<0.05)，B组HSP70明显高于对照组，两组比较差异具有统计学意义(q=14.89，P<0.05)，且B组HSP70明显高于A组，两组比较差异具有统计学意义(q=4.41，P<0.05)，见表1。, 百拇医药(陈佩婵 侯延平 郑振 刘先秒 谭庆林)