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编号:12760811
人血清白蛋白诱导人肾小管上皮细胞对Egr—1表达的影响(2)
http://www.100md.com 2015年12月5日 中国医学创新 2015年第34期
     1.2 主要仪器 SW-CJ-2F(标准型)双人双面垂直工作台;二氧化碳培养箱(HF90);台式高速冷冻离心机(D37520) Thermo Fisher,德国;DY-CZ-24D型电泳槽,北京市六一仪器厂;DYY-2C型电泳仪,北京六一仪器厂;半干转印仪,美国BIO-RAD。

    1.3 方法

    1.3.1 细胞培养及分组 将HK-2细胞于含10%胎牛血清1640培养基、培养条件5% CO2,37 ℃培养。每2~3天换液1次,每3~5天传代1次。镜下观察细胞生长至90%~95%融合时,用0.25%胰酶消化后,待镜下观察细胞间隙增大后移除胰酶加入含10%胎牛血清1640培养液终止消化,按1∶2~1∶3传代。待细胞长至90%~95%融合时,用无血清培养基同步化24 h。细胞随机分为A、B、C、D四组并分别给予不同浓度的人血清白蛋白培养,A组浓度为0 mg/mL、B组浓度为10 mg/mL、C组浓度为20 mg/mL、D组浓度为40 mg/mL,实验分别观察24、48和72 h。

    1.3.2 观察指标及方法 免疫印迹检测Egr-1的表达:HK-2细胞经药物处理后分别于24、48和72 h收集细胞,用4 ℃预冷的PBS漂洗3次 ......
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