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编号:12954560
高效液相色谱法与L—蛋氨酸γ—裂解酶法在血清同型半胱氨酸含量检测中的应用(2)
http://www.100md.com 2016年8月25日 《中国医学创新》 2016年第24期
     1.2 方法 首先,分别抽取两组研究对象空腹静脉血,经抗凝分离处理后,低温保存血清待检;其次,提取其中的同型半胱氨酸,形成不同浓度的同型半胱氨酸标本;最后,将其稀释成不同的浓度,分别使用高效液相色谱法与L-蛋氨酸γ-裂解酶法对血清中同型半胱氨酸含量进行测定。同型半胱氨酸的浓度分别为1.0、2.0、5.0、10.0、20.0、40.0 μmol/L。高效液相色谱法检测仪器包括AU2700全自动生化分析仪器、510液相色谱仪、HCU色谱分析柱等,对测定样品进行预处理,然后加入相关试剂进行检测。L-蛋氨酸γ-裂解酶法:在3(γ-羧乙基)膦氯化氢作用下,血清中胱氨酸、蛋白结合型和混合型同型半胱氨酸转化成游离型的同型半胱氨酸,加入的L-蛋氨酸γ-裂解酶在PLP辅助下,将游离的同型半胱氨酸分解出

    α-丁酮酸、氨和硫化氢。硫化氢和荧光化合物N,N-双甲基- p -亚苯二胺双盐酸(DMPD·2HCl)在Fe3+和酸性条件下反应形成最高吸光率在670 nm处的蓝色产物亚甲蓝,在全自动生化分析仪上通过定量测定亚甲蓝在670 nm处的吸光率来计算血清总同型半胱氨酸的含量 ......
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