川芎含药血清诱导小鼠胚胎干细胞分化为心肌细胞的实验研究(2)
1.3 实时定量PCR检测心肌细胞特异基因β-MHC的表达 实验细胞分四组，即川芎血清低剂量组，川芎血清高剂量组，大鼠血清组和胎牛血清组，每组6孔。提取总RNA并测定浓度，分析其完整性，进而合成cDNA，β-MHC Forward：5’-AGAGCTCATCCTTTCTGGTCAT-3’，Reverse：5’-ACCATCTGACATTCTACAGTCT-3’；GAPDH Forward：5’-ATGTGTCCGTCGTGGATCTGA-3’Reverse：5’-ATGCCTGCTTCACCACCTTCT-3’[4-5]。PCR体系为：12.5 μL SYBR Green Realtime PCR MasterMix，2.5 μL样品溶液，1.0 μL引物加水至25 μL。反应条件：95 ℃下加热60 s，进行预变性；95 ℃变性15 s，60 ℃退火15 s，72 ℃延伸30 s，如此循环40次。扩增后的产物主要是采用荧光检测 ......
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