1.2 免疫组织化学 石蜡切片4 μm于多聚赖氨酸处理的载玻片上，烤片机上60 ℃过夜，切片脱蜡至水后磷酸盐缓冲液洗片3次。于0.01 M、pH值6.4的枸橼酸缓冲液中高压修复10 min，磷酸盐缓冲液洗片3次，滴加山羊血清封闭，孵育15 min。滴加Ubc9一抗(Abcam公司，货号：ab21193，浓度1∶200)，4 ℃过夜孵育。滴加生物素标记的二抗(北京中杉金桥公司)，37 ℃箱孵育30 min；DAB显色5 min，自来水终止显色；苏木素复染30 s，封片；每次染色用PBS液代替一抗做阴性对照。Ubc9阳性细胞定位于细胞质或/和细胞核，免疫组化结果判定方法参考文献[7]：以阳性细胞百分比(0分，0～4%；1分，5%～24%；2分，25%～49%；3分，50%～74%；4分，>75%和染色强度(阴性0分，弱阳1分，中等阳2分和强阳3分)的乘积进行评分，评分<6分为低表达，≥6分为高表达。

    1.3 细胞原代培养及药敏试验 电子天平称取新鲜组织1 g。青链霉素即用液反复冲洗，将组织剪碎置于清洁塑料EP管中尽量剪碎至稀糊状 ......