1.3 免疫荧光化学染色 切片脱蜡、水化、封闭处理后，兔抗ISL-1(1∶100，AB Tech)抗体分别与山羊抗抗Smo(1∶50，Santa Cruz)、Ptc1(1∶20，Santa Cruz)抗体混合，切片室温孵育过夜，混合二抗FITC-驴抗兔IgG(1∶50，Santa Cruz)和Cy3-驴抗山羊IgG(1∶50，康为世纪生物有限公司)孵育1 h，核复染10 min，封片，荧光显微镜照相。

    2 结果

    (1)胚龄9 d，心管弯曲成襻，前肠与动脉囊之间间充质细胞极少，前肠腹侧壁内胚层局部增厚，将向呼吸系统发育，称之为呼吸内胚层，呈Shh阳性表达(图1A)，心管动脉端可见ISL-1阳性细胞，并与心肌特异性MHC表达重叠(图1B～C)。(2)胚龄10 d，呼吸内胚层继续增厚并向腹侧突出，呈Ptc1阳性表达(图2A)，表明呼吸内胚层向喉气管沟发育，呼吸内胚层与动脉囊之间间充质细胞增多，并在内胚层突起周围呈ISL-1较强表达(图2B)。(3)胚龄11 d，喉气管沟继续发育，其顶端形成ISL-1和Ptc1双阳性实心内胚层细胞索(图3A) ......