1.2 方法

    1.2.1 细胞培养 采用GH3大鼠垂体腺瘤细胞株，Ham’s培养基(2 mmol/L谷氨酰胺，100 U/mL青霉素，100 μg/ml链霉素，160 U/L胰岛素)，热灭活的10%马血清，2.5%胎牛血清。细胞常规在37 ℃、5%CO2、100%湿度的孵箱中培养。在倒置显微镜下取处于对数生长期、形体良好的细胞进行实验。用多聚赖氨酸包被细胞培养瓶，待GH3细胞贴壁生长，融合度达85%～90%时，去除原培养基，加入适量的PBS(对于100 mm平皿，加入2 mL PBS)漂洗细胞两次。加入1 mL 0.05%胰蛋白酶消化液，37 ℃消化数分钟直至镜下观察细胞变圆且透亮，直接加入2 mL完全培养基终止消化并将细胞从平皿底部轻轻吹下，全部转移至干净的50 mL离心管中，800 r/min离心5 min。弃去上清，加入1 mL完全培养基轻轻吹打直至细胞完全分散。根据实验需要，将适量细胞加入已经加入完全培养基细胞培养皿中。

    1.2.2 MTT法检测OHTam和E2对GH3细胞增殖的影响 GH3细胞培养贴壁24 h后 ......