(1)提前配置12%SDS-聚丙烯酰胺凝胶，上样后，设置电压为70 V 30 min，待样品通过浓缩胶后将电压改为110 V 1 h，溴酚蓝指示剂到达凝胶底部终止电泳。(2)取出凝胶，依据Marker指示，将目的蛋白所在位置凝胶切下来与PVDF膜制成“转膜三明治”，放入转模槽中100 V电压转膜2 h。(3)转膜结束后，将PVDF膜取出放置于5%脱脂奶粉封闭过夜。(4)将目的蛋白抗体用1×TBST溶液按照1︰1 000的比例稀釋，用PVDF膜放入杂交袋中于37℃孵育4 h，1×TBST溶液洗膜3次(10 min/次)后再将PVDF膜用二抗室温孵育45 min。(5)1×TBST洗膜3次(10 min/次)，将ECL显影剂A、B液按照1︰1比例混合配置并滴加在PVDF膜上，应用Biorad凝胶成像系统曝光成像并拍照。

    1.3 统计学处理 采用SPSS 21.0软件对所得数据进行统计分析，计量资料用(x±s)表示，比较采用t检验，P<0.05为差异有统计学意义。

    2 结果

    2.1 Zebularine对乳腺癌细胞株MDA-MB-231细胞增殖的影响 MTT法检测不同浓度(0 ......