Glut-1及VEGF在结肠癌中的表达及与临床指标的关系(2)
1.2 仪器与方法1.2.1 主要仪器及试剂 (1)仪器:Galanz医用微波炉(英国)、Thermo自动脱水机(英国)、Autostainer 480免疫组化染色仪(美国)、Olympus照相显微镜(日本)等;(2)试剂:CST兔抗人VEGF单克隆抗体(美国)、Glut-1抗体(Santa Cruz公司)、氚标-葡萄糖(中国原子能研究所)、MTT溶液(Sigma公司)。
1.2.2 染色方法 (1)将石蜡切片保持在36 ℃环境下烘烤2 h,然后用二甲苯脱蜡、梯度酒精脱水,在37℃的过氧化氢(H2O2)溶液中孵10 min,接着用磷酸缓冲盐溶液(PBS)冲洗3次,5 min/次。(2)将其置入1 000 mL枸橼酸(Citric Acid)缓冲液中煮沸(95 ℃)15~20 min,自然冷却(>20 min)后用冷水冲洗缸子,然后降温冷却至常温后再用磷酸缓冲盐溶液冲洗3次,5 min/次。(3)使用正常羊血清工作液将其封闭在37 ℃环境下10 min ......
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