1 资料与方法

    1.1 一般资料 收集2010年1月-2017年1月本院47例CCA患者的癌组织及对应癌旁组织(距离肿瘤2～3 cm)标本。另选择同期14例正常胆管组织标本(因外伤等原因切除的标本)。纳入标准：年龄25～75岁，均接受CCA根治手术且经术后病理学检查确诊为CCA;术前均未接受放化疗等肿瘤相关治疗;有完整的临床病理资料及随访资料。排除标准：既往或同期合并有其他恶性肿瘤相关疾病的患者。所有患者及家属均知情同意并签署知情同意书，本研究已经医院伦理委员会批准。

    1.2 方法與试剂 采用免疫组化(SP)法检测PI3K、Akt及PTEN蛋白在CCA组织、癌旁组织及正常胆管组织中的表达情况。所有标本手术切除后均经10%甲醛固定及石蜡包埋，4 μm厚度连续切片。主要试剂包括兔抗人PI3K单克隆抗体、兔抗人Akt单克隆抗体、兔抗人PTEN多克隆抗体、SP二抗及DAB试剂盒均全套购自北京中杉生物技术有限公司，操作步骤严格按照试剂盒说明书进行。用公司提供的已知阳性组织作阳性对照，以PBS代替一抗作阴性对照。

    1.3 判定标准 采用双盲法由两位有经验的病理医师对切片免疫组化染色结果进行判读。PI3K、Akt及PTEN蛋白的阳性表达均以细胞浆出现背景清晰的棕黄或棕褐色颗粒为标准 ......