林晔

    非酒精性脂肪性肝炎(Nonalcoholic steatohepatitis，NASH)是非酒精性脂肪性肝病(Nonalcoholic fatty liver disease，NAFLD)的主要进展形式，具有较高的肝纤维化和肝癌风险，主要病理特征包括脂肪变性、气球样变、肝细胞损伤、混合性炎细胞浸润和不同程度的纤维化[1-2]。近期研究发现，线粒体结构和功能异常参与NASH 的起病与进展，炎症小体在炎症以及纤维化进展中起到关键作用[3-6]。本研究旨在明确NLRP3 介导线粒体损伤在NASH 中的作用机制，以及具有线粒体保护作用的线粒体靶向抗氧化肽SS-31 对NLRP3 信号通路的作用以及对NASH 的影响，以寻求干预NASH的有效药，现报道如下。

    1 材料与方法

    1.1 材料与试剂 选择健康8 周龄雄性C57BL/6J 小鼠共30 只，体重150～180 g，平均(171.33±10.12)g，购自中国科学院动物试验中心。SS-31(广州天源生物科技有限公司)、HE 染液(上海莼试生物技术有限公司)、Caspase-1 一抗、IL-1β 一抗、IL-18一抗、Caspase-1 二抗、IL-1β 二抗、IL-18 二抗(均购自美国Abcam 公司)、DAB 显色液(广州鼎国生物技术有限公司)、苏木素(成都格利普生物科技有限公司)、Trizol 试剂(深圳时代生物科技有限公司)。

    1.2 方法

    1.2.1 构建NASH 模型 采用胆碱-蛋氨酸缺乏(MCD)饲料喂养法，连续喂养8 周，脱颈法处死获得肝脏组织，HE 染色病理观察肝脏出现脂肪变、炎症浸润和纤维化，符合NASH 病理改变为造模成功。

    1.2.2 实验分组和观察指标 30 只小鼠按随机数字表法分为对照组、模型组和干预组，每组10 只。对照组正常饮食喂养，模型组和干预组采用MCD 饲料喂养。干预组腹腔注射SS-31 3 mg/kg，1 次/周；对照组注射等量0.9%氯化钠溶液，共持续喂养8 周。观察各组小鼠体重，使用生化分析仪检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST)含量；HE 染色观察肝脏组织病理变化；实时定量PCR(RT-PCR)法检测肝脏线粒体损伤指标 ......