袁辉 张淑敏 王得利 栾海蓉 石屹 徐吉雨

    钙敏感受体(calcium sensing receptor，CaSR)是G 蛋白偶联受体超家族中C 家族成员，由1 078个氨基酸组成，包含四个主要区域：细胞外N 末端区域(ECD)、连接ECD 和第一跨膜的富含半胱氨酸结构域螺旋结构、七个跨膜(TM)结构域和细胞内结构域[1-3]。广泛表达于真核和原核细胞，其配体为多价阳离子和多胺等。具有维持机体钙稳态及其他金属离子稳态的功能[4-6]。本研究拟通过观察CaSR 在裸鼠移植瘤模型和C-33A 细胞中的表达情况，通过给予CaSR 激动剂(R568)、CaSR 抑制剂(Calhex231)干预，从而推断CaSR 调控宫颈癌C-33A 细胞增殖和迁移的机制。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物、细胞及分组 30 只5 周龄BALB/c雌性裸鼠(18±2)g 购自常州卡文斯实验动物有限公司。造模采取裸右侧腋下皮下注射C-33A 细胞悬混液(5.5×107个/mL)。按瘤体大小均匀分组：Model(移植瘤模型)组、Model+R568 组和Model+Calhex231 组，每组10 只，体重分别为(22.18±2.03)、(23.99±2.45)、(22.79±2.77)g，三组比较差异无统计学意义(P>0.05)。Model+R568组和Model+Calhex231 组每日分别腹腔注射R568(10 μmoL/kg)和Calhex231(10 μmoL/kg)。SPF 级饲养1 个月，安乐死后主动脉取血并分离取出移植瘤称重。体积(mm3)=0.5×长径×短径2。抑瘤率=(Model 瘤重-Model+R568 组或Model+Calhex231 组瘤重)/Model 瘤重×100%。宫颈癌C-33A 细胞购自上海泽叶生物科技有限公司(货号：AC102117)分为Control 组，R568(5 μmoL) 组，Calhex231(3 μmoL)组。

    1.2 ELISA 法测定血清及培养基中MMP2 和MMP9含量 ELISA 测定试剂盒均购自Beyotime 公司，饲养4 周，取待测鼠血清(培养基)后，置于冰盒内。在96 孔酶标板中，设置标准蛋白孔、空白孔、对照孔和待测孔。按照厂家提供说明操作，显色后使用酶标仪，在450 nm 波长条件下检测每个待测孔的OD 值，最后按照标准曲线和公式计算每组待测血清(培养基)中MMP2 和MMP9 浓度。

    1.3 Western blot 检测蛋白表达 将研磨碎的瘤组织(C-33A 细胞)置于1.5 mL EP 管中加入0.5 mL RIPA缓冲液裂解 ......