李培勇 曾崎冈 戴勇 魏成功 老昌辉

    c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase，JNK)信号通路在肿瘤细胞增殖分化、衰老凋亡等多样生物学活性方面起着枢纽作用，可作为恶性肿瘤分子治疗的前卫靶点[1]。丝裂原活化蛋白激酶-7(mitogen-activated protein kinase kinase-7，MKK-7)参与细胞炎症因子和应激刺激等信号通路介导的细胞应答，通过磷酸化JNK结构域而特异性激活JNK活性[2]，MKK-7/JNK通路直接影响肿瘤细胞的功能状态，但MKK-7作用复杂，其双向调控机制仍有待进一步阐述[3]。中医药防治非小细胞肺癌，特别是在疾病的终末期，可起到明显改善临床症状、缓解并发症等作用[4]。本课题组前期研究显示补肾培元胶囊临床治疗多种恶性肿瘤性疾病疗效显著，其药效机制与JNK信号通路有关[5]。本研究旨在从血清药理学维度探索补肾培元胶囊对非小细胞肺癌A549细胞抗增殖特性调控机制，为药物进一步开发提供实验结论支持。

    1 材料与方法

    1.1 细胞与动物 非小细胞肺癌细胞系A549细胞株，由广东省中医药工程技术研究院细胞库惠赠。实验动物：SPF级SD雄性大鼠，(200±20)g，购自广东省医学实验动物中心，质量合格证编号：No44007200048391。

    1.2 药品试剂 补肾培元胶囊(简称BSPY，广东省中西医结合医院制剂室，批号：粤Z20070308)。5-氟尿嘧啶(5-FU，上海麦克林公司)；GlutaMAX?培 养 基、0.25% Trypsin-EDTA、胎牛血清(美国赛默飞公司)；JNK、MKK-7 Rabbit Polyclonal antidody(美国Proteintech公司)；JNK、MKK-7 Primer均由生工生物工程(上海)股份有限公司合成。

    1.3 主要仪器 Leica DMi8高速成像平台[徕卡显微系统(上海)贸易有限公司]；SmartSpec plus核酸蛋白测定仪、IQTM5型荧光定量PCR仪、电泳仪、半干转膜仪(美国伯乐公司)；低温离心机(美国IEC公司)；超净工作台(苏州中亚净化设备有限公司)；GUIGO-99-IID型超声波细胞粉碎机(上海桂戈科学仪器有限公司) ......