刘玉兰 何凤屏 郭伟强 刘英 黄从云 李定云 黄亮 陈晓旋

    胰腺癌是世界上最常见的消化道恶性肿瘤之一[1]。近年来，随着我国人民的生活节奏加快及饮食结构的改变，胰腺癌发病率呈明显上升趋势。目前的肿瘤标志物CEA 和CA-199 联合检测对胰腺癌诊断的灵敏度仅为45%左右[2]，特别需要一种敏感性和特异性高的标志物。microRNA(miRNA)是一类非编码小分子的18～24 个核苷酸的单链RNA。miRNA 通过降解或抑制mRNA 的翻译来抑制靶基因的表达[3]。miRNA 在肿瘤的发生发展过程中起到调控靶基因的重要作用[4]。张力蛋白同源物基因(PTEN)是肿瘤抑制基因，具有脂质和蛋白双重磷酸活性，在细胞生长、增殖、生存、凋亡、血管生成、细胞迁移和侵袭等方面发挥重要作用[5]。PTEN在肿瘤中表达下调或者发生缺失突变时，可激活PI3K/Akt 信号通路，从而引起肿瘤的发生发展、侵袭和转移[6]。

    miRNA 能在肿瘤组织内稳定表达，还能稳定存在于血清、血浆、全血中[7-9]，可作为一种无创的肿瘤诊断标志物。Liu 等[10]研究发现miRNA在胰腺癌患者循环血中的表达明显上调，但是，miRNA-10 调控PTEN 促进胰腺癌细胞增殖和迁移的作用机制未见有报道。因此，本文通过研究miRNA-10 调控PTEN 在胰腺癌的表达、与病理分期的相关性以及生物学功能，为预测患胰腺癌的风险和预后监测提供实验依据。

    1 材料与方法

    1.1 临床资料 在粤北人民医院肝胆外科选取2017 年3 月-2019 年9 月住院并病理诊断证实为胰腺癌的患者80 例作为研究组，所有患者术前均未接受放射治疗、化学药物、免疫治疗。另选取同期健康体检者80 例作为对照组。(1)纳入标准：①病理确诊为胰腺癌；②未经任何放疗、化疗等治疗。(2)排除标准：①合并其他恶性肿瘤病史；②家族遗传性糖尿病。本研究已通过汕头大学医学院附属粤北人民医院伦理委员会批准，所有研究对象均签署知情同意书。

    1.2 试剂及仪器 总RNA 提取试剂盒、qRT-PCR试剂盒和逆转录试剂盒由上海生工生物工程股份有限公司提供，miRNA-10 和PTEN 试剂盒与内参U6上下游引物由广州锐博生物有限公司提供。实时荧光定量PCR 检测使用BIO-RAD CFX96 型仪器(美国BIO-RAD 公司)。

    1.3 方法

    1.3.1 采集样本 所有研究对象静脉采血3 mL，采用EDTA 抗凝剂，在3 300 r/min 下离心16 min，然后 ......