陈敏洋

    结直肠癌(CRC)为具有高隐匿性、低长期生存率特点的常见恶性肿瘤，是全球癌症相关性死亡的主要原因[1]。尽管肿瘤的诊疗技术在不断发展，但CRC 的治愈率和长期生存率并没有显著的提高[2]。结直肠癌导致死亡的主要原因是远处转移，预计约60%的结直肠癌患者会出现转移[3]。肿瘤转移是一个高度复杂的多步骤过程，并且与上皮-间质转化(EMT)密切相关[4]。而miRNA为动植物中广泛存在的非编码RNA[5]。目前许多研究发现，在各种疾病包括肿瘤的发生、发展、转移中，各种miRNA 参与其中。有研究证实，CRC的miRNA 差异表达谱中miR-767-3p 明显高表达，且具有一定的诊断价值[6]。而miR-767-3p 的表达是否参与癌细胞的浸润和转移有待探讨，可通过研究癌细胞EMT 的程度分析。本研究通过观察结直肠癌细胞和癌前细胞的miR-767-3p、EMT 相关蛋白表达情况及患者的病理特征，分析、推测结直肠癌组织中miR-767-3p 表达水平、EMT 及癌组织侵袭和转移的关系。

    1 资料与方法

    1.1 一般资料 选取江西省中西医结合医院病理科2017 年1 月-2021 年12 月收治的70 例结直肠癌患者的癌组织、癌旁正常组织石蜡标本及相关的临床资料纳入研究。男39 例，女31 例，年龄30～95 岁，平均(56.24±5.96)岁。其中结肠癌33 例，直肠癌37 例；TNM 分 期：Ⅰ/Ⅱ/Ⅲ/Ⅳ期分别4/29/22/15 例。诊断标准：参照文献[7]《中国结直肠癌诊疗规范(2015 版)》中结肠癌或直肠癌的诊断标准。纳入标准：符合上述标准且经病理学诊断确诊为CRC；活检前未经过放化疗治疗；根据影像手段、CRC 手术和病理组织可以明确肿瘤的癌体位置、浸润深度及转移情况。排除标准：合并其他肿瘤；严重肝肾功能损害。

    1.2 方法 收集患者结直肠癌组织和癌旁正常组织包埋在石蜡中，冰冻层-20 ℃保存。(1)miR-767-3p水平检测：采用PCR 法检测组织miR-767-3p 表达[8]。使用TRIzol 试剂从组织中提取总RNA。用反转录试剂盒将提取的总RNA 逆转录为cDNA，后PCR 扩增仪中扩增，反应体系20 μL，反应条件为预变性95 ℃ 30 s，95 ℃ 5 s，扩增60 ℃44 s，40 个循环，以U6 作为内部对照，以2-ΔΔCt法计算miR-767-3p 相对表达量。U6snRNA 引物序列：TTCGTGAAGCGTTCCATATrrT；miR-767-3p 引物序列：TCTGCTCATACCCCATGGTTTCT ......